WWW.KN.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные ресурсы
 

Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 9 |

«V РОССИЙСКИЙ СИМПОЗИУМ БЕЛКИ И ПЕПТИДЫ Петрозаводск, 8–12 августа 2011 г. ТЕЗИСЫ ДОКЛАДОВ ПЕТРОЗАВОДСК УДК 577.112(063) ББК 28.072 Б43 СИМПОЗИУМ ОРГАНИЗОВАН ПРИ ...»

-- [ Страница 2 ] --

Учреждение РАН Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН, Москва МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва Toll-подобные рецепторы были первоначально открыты методами прямой генетики («от фенотипа к гену») в контексте программ эмбрионального развития у плодовой мушки. Установление их центральной роли во врожденном иммунном распознавании у млекопитающих произвело революцию в иммунологии. В дальнейшем механизмы передачи внутриклеточного сигнала, а также последующие молекулярные события, связанные с иммунорегуляцией и активацией приобретенного иммунитета, были, в основном, установлены комбинацией методов биохимии и «обратной генетики». В последнем случае анализируется иммунологический фенотип мышей, у которых кандидатные гены отключены во всех или избранных типах клеток организма.

Наша лаборатория использует методы обратной генетики для установления физиологических функций некоторых цитокинов, в частности, Фактора Некроза Опухолей, в иммунологической регуляции и защите организма от инфекций.

Пленарные доклады 49

ПРИРОДНЫЕ ТОКСИНЫ И ИХ МЕМБРАННЫЕ МИШЕНИ

Гришин Е.В.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 E-mail: grev@ibch.ru Природные яды представляют собой сложные смеси многих компонентов различной химической природы. Одними их самых распространенных компонентов являются полипептиды, которые часто образуют своеобразные комбинаторные библиотеки молекул, обладающих направленным действием на мембранные рецепторы и ионные каналы.



В настоящее время идентифицированы полипептидные компоненты ядов, взаимодействующие со многими типами ионотропных систем клеточной мембраны. Такие пептиды применяются для направленной регуляции функциональной активности мембранных ионотропных систем и идентификации экспрессированного набора клеточных рецепторов и ионных каналов. Предполагается, что в природных ядах можно найти компоненты, специфичные практически для любого типа нейрональных мембранных рецепторов. Подобные компоненты обладают значительным фармакологическим потенциалом и могут быть использованы для создания новых медицинских препаратов. Проводится поиск компонентов ядов, взаимодействующих с потенциал-зависимыми Na+- и Ca2+-каналами, ваниллоидным рецептором TRPV1, пуринэргическими P2X-рецепторами, протончувствительными рецепторами ASIC, а также проявляющих антибактериальное действие.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

МНОЖЕСТВЕННЫЕ ФОРМЫ ПРОТЕАСОМ И СУДЬБА

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ

Шарова Н.П.

Учреждение РАН Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, 119334 Москва, ул. Вавилова, 26 E-mail: npsharova@bk.ru Исследование механизмов развития злокачественных опухолей и поиск новых мишеней для создания противоопухолевых лекарств до сих пор остаются важнейшими проблемами биологии и медицины. Открытие в 80-х годах прошлого века протеасом, уникальных мультипротеазных структур, выявило новые перспективы в разработке этих проблем. Все клеточные популяции характеризуются строго определенным соотношением множественных форм протеасом, к числу которых относятся 26S- и 20S-протеасомы, конститутивные и иммунные протеасомы. Можно полагать, что нарушение соотношения и функционирования этих форм связано с различными патологическими состояниями, в том числе со злокачественной трансформацией клеток и ростом опухолей. В настоящей работе исследованы изменения активности и экспрессии тотального пула протеасом, экспрессии протеолитических иммунных и конститутивных субъединиц протеасом и 19S-активатора, отражающего содержание 26S-протеасом, при образовании и развитии опухолей.





При этом использованы экспериментальная модель образования доброкачественных и злокачественных опухолей печени мышей CBA/Lac x BL/6 F1 под действием дипина и частичной гепатэктомии и послеоперационный опухолевый материал щитовидной железы пациентов на разных стадиях заболевания. Указанные параметры пула протеасом изучены также в асцитной карциноме Krebs-II, перевиваемой мышам линии Balb/c, в спонтанно возникших Т-лимфоме мышей BYRB и карциноме молочной железы мышей BLRB и в регрессирующей карциносаркоме Walker 256, привитой крысам линии Brattleboro. Показано, что при образовании злокачественных (но не доброкачественных) опухолей и при их росте увеличивается экспрессия 19S-активатора протеасом. В процессе регрессии злокачественной опухоли, напротив, происходит резкое уменьшение экспрессии 19S-активатора. Остальные исследованные характеристики протеасом либо не изменяются, либо подвергаются разнонаправленным изменениям в развитии различных опухолей. Таким образом, именно 19S-активатор протеасом можно рассматривать как перспективную мишень для создания новых противоопухолевых лекарств.

Работа выполнена при финансовой поддержке Минобрнауки России (госконтракт № 02.512.12.2047) и РФФИ (грант № 09-04-00077а).

Пленарные доклады 51

THE ENERGETIC BASIS OF PROTEINS AND THEIR COMPLEXES

Privalov P.L.

Johns Hopkins University, Baltimore, USA The realization that proteins – molecules consisting of thousands of atoms, all participating in thermal motion – represent individual quazi-macroscopic systems is one of the greatest achievements of modern science. Correspondingly, proteins are usually called «macromolecules». As with other macroscopic systems, understanding an individual protein requires knowledge of its thermodynamics which define its most general properties. The thermodynamics of proteins is expected to be exceptional because of the unusual spatial organization of these objects: every atom in their structure occupies a definite place, as in a crystal, but in contrast to a crystal, there is no symmetry and no periodicity in their arrangement. Such aperiodic macroscopic systems have never been dealt with before in physics. Therefore, one cannot a priori predict the thermodynamic properties of a protein. Correspondingly, without knowing their thermodynamics one cannot engineer new proteins. Without knowledge of their energetic basis, all discussion of the principles of organization of these macromolecules, of the mechanism of their formation and the stabilization of their three-dimensional structure, moreover of their functional properties (which assumes certain rearrangements in their structure) is merely speculation. This has become apparent only after many years of unsuccessful attempts to solve these problems by theoretical analysis of the known structure of proteins.

This failure has made it obvious that structural information represents only one facet of a protein, while the other facet is its energetic basis. These two fundamental pieces of information cannot be deduced directly, one from the other, they must be separately determined experimentally using very different methods. Here we consider the main achievements of the thermodynamic studies of proteins and their complexes.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

РАЗРАБОТКА ОСНОВ СОЗДАНИЯ ПЕПТИДНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

ПРЕПАРАТОВ

Мясоедов Н.Ф.

Учреждение РАН Институт молекулярной генетики РАН, 123182 Москва, пл. Ак. Курчатова, 2 E-mail: landr@img.ras.ru Известна роль пептидов в регуляции самых разнообразных функций организма, от простых до сложных, включая функции ЦНС человека. Химия и биология предоставили в наше распоряжение как большое число эндогенных пептидных структур, так и их разнообразные функции.

Все эти обстоятельства уже давно привлекают внимание фармакологов с целью создания на основе природных пептидов новых лекарственных препаратов, которые в силу своего происхождения должны быть лишены побочных эффектов.

Однако эти усилия до настоящего времени дали незначительный результат. В основном это связано с полифункциональностью эндогенных пептидов и их быстрым протеолизом, что делает их действие кратковременным. В докладе обсуждаются эти проблемы и пути их решения.

Особое внимание в докладе уделяется механизму действия пептидов, которые, как правило, связаны с основными клеточными функциями. На примере взаимодействия с клеточными структурами пептидов Семакса, Селанка, нейротензинподобных пептидов и других, рассматриваются вопросы их действия на рецепторные системы клетки, изменения транскриптомы, формирование протеомного клеточного ответа. Совокупность этих данных позволяет наметить пути направленного конструирования пептидов, объяснить наблюдаемые клинические эффекты лекарственных препаратов пептидной природы.

Работы выполнены при поддержке Программы фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология», Программы фундаментальных исследований Президиума РАН «Фундаментальные науки – медицине», гранта Президента РФ для поддержки ведущих научных школ № НШФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009–2013 годы, ГК № 14.740.11.0179.

ТЕЗИСЫ СЕКЦИОННЫХ ДОКЛАДОВ

Секция 1 Выделение, очистка, характеризация белков и пептидов.

Пептидомика. Протеомика Секционные доклады 55

ПЕПТИДОМИКА ЭКЗОГЕННЫХ ОЛИГОПЕПТИДОВ

Замятнин А.А.1,2 Учреждение РАН Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, 119071 Москва, Ленинский просп., 33 Universidad Tcnica Federico Santa Maria, El Centro Cientifico Tecnolgico de Valparaiso, av. Espaa 1680, Valparaiso, Chile

E-mail: aaz@inbi.ras.ru; alexander.zamyatnin@usm.cl

Большинство исследований природных олигопептидов посвящено изучению эндогенных олигопептидных регуляторов, образующихся в живых организмах из специализированных предшественников. Однако к настоящему времени выделено уже несколько сотен пептидных структур, являющихся фрагментами хорошо известных белков. Так, большое число фрагментов гемоглобина было выявлено в мозге и шишковидной железе быка, казеина – в коровьем молоке, экспериментально идентифицированы природные фрагменты и целого ряда других белков.

Физиологические функции многих из них неизвестны также как не всегда ясно, являются ли они продуктами естественного протеолиза или образуются в процессе выделения.

В то же время, очевидно, что пищевые белки в пищеварительном тракте под действием протеолитических ферментов (пепсина, трипсина, химотрипсина и других) образуется динамический пул экзогенных белковых фрагментов. Их аминокислотные последовательности могут совпадать с первичными структурами известных физиологически активных олигопептидов, обнаруженных в других источниках.

Это предположение было нами подтверждено при изучении фермента бромелаина ананаса [1], бычьего гемоглобина [2,3] и казеина [4,5]. В результате сравнения аминокислотных последовательностей всех фрагментов выбранного белка (полного фрагментома) с первичными структурами олигопептидов базы данных EROP-Moscow (http://erop.inbi.ras.ru/) было показано, что десятки фрагментов этих белков могут проявлять функции нейропептидов, гормонов, иммуномодуляторов и другие функциональные свойства. Очевидно, что общее число возможных фрагментов этих и других белков существенно больше и их функциональная значимость будет выявляться в ходе дальнейших экспериментальных исследований.

Литература

1. Замятнин А.А., Борчиков А.С. Нейрохимия, 24, 21–29, 2007.

2. Замятнин А.А. Биофизика, 53, 725–733, 2008.

3. Замятнин А.А. Биохимия, 74, 247–256, 2009.

4. Замятнин А.А. Успехи биологической химии, 49, 405–428, 2009.

5. Zamyatnin A.A. Proceedings of the 31st Peptide Symposium, M.Lebl, M.Meldal, K.J.Yensen, T.Hoeg-Yensen, Eds., European Peptide Society, pp. 32–33, 2010.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ТЕХНОЛОГИИ ПЕПТИДОМИКИ ДЛЯ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

Зиганшин Р.Х.1, Арапиди Г.П.1, Азаркин И.В.1, Говорун В.М.1,2, Иванов В.Т.1 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 ФГУ НИИ физико-химической медицины ФМБА России, 119992 Москва, ул. Малая Пироговская, 1а Пептидомные исследования, направленные на тотальную идентификацию содержащихся в биологических образцах пептидов, а также изучение их свойств является быстро развивающейся областью биологии. Этот подход активно использовался для изучения разнообразных биологических жидкостей, клеток и тканей.

Были выявлены сотни новых, часто биологически активных пептидов, а также показано, что составы соответствующих пептидных пулов чувствительны к физиологическому состоянию экспериментальных животных, меняясь под воздействием различных патологий, стресса, генетических модификаций, изменения иммунного статуса и воздействия фармакологических агентов. Развитие протеомных технологий в последние годы привело к созданию мощного инструментария для чувствительного и производительного анализа пептидов, что, в свою очередь, сделало реальными перспективы использования результатов пептидомных исследований в области клинической диагностики.

В докладе будут представлены последние результаты нашей работы по поиску в сыворотке крови пациентов с раком яичников, колоректальным раком и сифилисом пептидных маркеров этих заболеваний. В результате оптимизации условий пробоподготовки образцов сыворотки крови для их дальнейшего анализа методом MALDI-TOF MS были значительно улучшены качество и воспроизводимость получаемых масс-спектрометрических профилей. Сравнительный анализ соответствующих масс-спектрометрических профилей позволил построить классификационные модели, способные детектировать все изученные патологии со специфичностью и чувствительностью близкой к 100%. LC-nanoESI-QTOF MS/MS анализ тех же самых образцов сыворотки крови позволил идентифицировать более 1000 пептидов. Будут обсуждены дальнейшие шаги по верификации полученных результатов.

Секционные доклады 57

ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИЧЕСКИХ ИЗМЕНЕНИЙ ПРОТЕОМА

И ПЕПТИДОМА В ПРОЦЕССЕ РЕГЕНЕРАЦИИ ПРОТОПЛАСТОВ МХА

PHYSCOMITRELLA PATENS

Скрипников А.Ю.1,2, Поляков Н.Б.1, Слижикова Д.К.1, Галямина М.Ю.3, Демина И.Ю., Казаков В.С.1, Козьмин Ю.П., Птушенко В.В2, Мажейка И.С.2, Мочалов К.Е.1, 1,3 1 Говорун В.М., Иванов В.Т.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, ГСП-1, Ленинские горы, 1 ФГУ НИИ физико-химической медицины ФМБА России, 119992 Москва, Малая Пироговская, 1а

E-mail: a.skripnikov@gmail.com

В последние годы мох P. patens стал ведущим модельным объектом, с помощью которого изучаются различные молекулярные механизмы развития растений.

Этот интерес обусловлен тем, что мох P. patens оказался единственным растительным объектом, к которому применимы с методы обратной генетики и технология генного таргетинга.

После полной расшифровки генома данного организма, стали возможными широкомасштабные исследования его протеома и пептидома, при этом, в качестве объектов протеомного анализа используется не только протонема и гаметофоры мха, но и протопласты, которые являются важными объектами биохимии, биофизики и биологии развития, а также используются как система трансформации при получении трансгенных растений. Регенерация протопластов мхов во многом сходна с прорастанием спор и существенно отличается от регенерации протопластов семенных растений. Из-за отсутствия обычной для регенерации протопластов семенных растений «каллусной фазы», деление протопластов мхов считают «истинной» регенерацией, в процессе которой происходит развитие нового организма, начинающееся у мхов с дифференциации протонемы.

В настоящей работе исследовано динамическое изменение протеома и пептидома в процессе регенерации протопластов через 24, 48 и 72 часа после начала регенерации. Показано, что при получении протопластов из протонемы мха, ряд белков, значительная часть которых участвуют в процессе фотосинтеза, подвергаются протеолизу, формируя пептидные фрагменты разной длины, при этом число определенных пептидов и белковые профили варьируют в течение времени исследования.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ЕСТЬ ЛИ НЕЙРОТОКСИНЫ В ЯДЕ ГАДЮКИ?

Уткин Ю.Н.1, Вульфиус Е.А.2, Горбачева Е.В.2, Старков В.Г.1, Никитин И.Г.1, Осипов А.В., Рамазанова А.С., Цетлин В.И.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 Учреждение РАН Институт биофизики клетки РАН, Пущино, Московская обл.

E-mail: utkin@mx.ibch.ru

По своей биологической активности все яды змей могут быть разделены на две основные группы: нейротоксичные, поражающие главным образом нервную систему, и гемотоксичные, воздействующие на различные компоненты крови. Первая группа включает яды змей семейства Elapidae, вторая – яды змей семейства Viperidae. Хотя яды Viperidae в основном гемотоксичны, имеющиеся литературные данные свидетельствуют о том, что они содержат также и нейроактивные компоненты. К таковым относятся, в частности, нейротоксичные фософлипазы А2, блокирующие синаптическую передачу нервного импульса. Для обнаружения новых нейроактивных соединений в ядах гадюк нами был использован протеомный подход в сочетании с анализом мРНК из ядовитых желез и определением биологической активности идентифицированных соединений. Так, из яда гадюки Никольского Vipera nikolskii были выделены две гетеродимерные фософолипазы А2, влияющие на нервно-мышечную передачу. Полные аминокислотные последовательности всех субъединиц определены на основании последовательностей кДНК. В ядовитых железах гадюк нами была обнаружена экспрессия мРНК, кодирующих белки семейств CRISP и трехпетельных токсинов. Белки этих семейств из ядов других змей являются нейротоксинами, блокирующими ионные каналы различной природы. Для обнаружения новых нейротоксинов в ядах гадюк мы исследовали влияние этих ядов на никотиновые холинорецепторы изолированных нейронов прудовика Lymnaea stagnalis. В результате этой работы идентифицирован и выделен ряд новых полипептидов, блокирующих никотиновые холинорецепторы. В частности, из яда шумящей гадюки Bitis arietans выделена фосфолипаза А2 нового типа, взаимодействующая с различными подтипами холинорецепторов и ацетилхолин-связывающими белками и представляющая собой белок с молекулярной массой 24,7 кДа, содержащий 14 дисульфидных связей. Это – первый белок, обладающий фосфолипазной активностью и блокирующий никотиновые холинорецепторы.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ и программ фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» и «Фундаментальные науки – медицине».

Секционные доклады 59

НОВЫЕ ГЕМОТОКСИЧНЫЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ

ИЗ ЯДОВ ЗМЕЙ

Рамазанова А.С., Осипов А.В., Филькин С.Ю., Старков В.Г., Уткин Ю.Н.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 E-mail: Lamsi@mail.ru Болезни системы кровообращения являются одними из наиболее распространенных заболеваний. В частности инфаркт остается наиболее частой причиной смерти людей пожилого и среднего возраста. При постинфарктном состоянии идет длительная гипоксия тканей и как следствие этого недостаточный синтез мембранных защитных белков против собственной системы комплемента. Основными путями решения этих проблем являются своевременная диагностика и эффективная терапия этих заболеваний, в частности снижение активности системы комплемента. Оксиагин, новый репролизин из яда кобры Naja oxiana, ингибирует активацию системы комплемента на одной из стадий классического пути, связываясь с иммуноглобулинами в тесной близости от места посадки компонента С4b и вызывая этим стерические или конформационные препятствия для последующего связывания и активации компонента С2. Нами определена полная аминокислотная последовательность оксиагина, который относится к классу РIII металлопротеиназ из ядов змей (SVMPs) и характеризуется трехдоменной организацией белка, включая металлопротеиназный и дезинтегрин-подобный домены, а также домен, богатый остатками цистеина.

Одним из направлений в диагностике и терапии заболеваний системы кровообращения является диагностическое (например, рептилазный тест), профилактическое и лечебное применение ферментов из ядов змей. Сейчас выпускают пять коммерческих препаратов тромбиноподобных ферментов (ТПФ). К наиболее изученным препаратам с прямым дефибринирующим действием относятся анкрод и батроксобин. Для поиска ТПФ с новыми фармакологическими свойствами нами изучены яды змей, обитающих на территории России. Так, в ядовитой железе гадюки Никольского идентифицирован новый ТПФ, названный нами никобином. В последовательности никобина имеется 15 уникальных аминокислотных замен. По результатам молекулярного моделирования структура идентифицированного нами фермента несколько отличается от структур известных ТПФ, что может свидетельствовать о наличии у никобина уникальной биологической активности. В настоящее время проводится выделение никобина из яда.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

МЕМБРАНО-АКТИВНЫЕ ПЕПТИДЫ ИЗ ЯДА ПАУКОВ

Василевский А.А., Гришин Е.В.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 E-mail: avas@ibch.ru Яды различных пауков содержат разнообразные соединения – от солей до крупных многодоменных белков. При этом для большинства исследованных видов характерно высокое содержание в их яде пептидов. Наиболее исследованными являются пептидные нейротоксины, селективно модулирующие функцию белковых рецепторов в нервной системе организмов-мишеней действия яда. Исследования последних лет показывают, что важное место среди компонентов яда пауков занимают пептиды другого типа, так называемые мембрано-активные пептиды (МАП), взаимодействующие с клеточными мембранами.

Простейшие МАП из яда пауков – короткие линейные катионные пептиды, формирующие при контакте с мембранами амфифильные -спирали. Обнаружены короткие МАП, не склонные к образованию -спиралей, а также МАП, содержащие S-S-мостики. Кроме того, некоторые дисульфид-богатые нейротоксины пауков эффективно взаимодействуют с мембранами, при этом структурным элементом, обеспечивающим такое взаимодействие, служит либо амфифильная -спираль, либо кластер гидрофобных остатков, образованный иным способом. Наиболее любопытными представляются токсины модульного строения, объединяющие в своем составе «модули-домены», соответствующие обычным МАП или нейротоксинам. Большинство МАП из яда пауков проявляют цитолитическую активность. Для одних характерна специфичность действия в отношении бактерий, для других – в отношении насекомых, для третьих, напротив, показан широкий спектр активности. Некоторые МАП проявляют синергизм действия с нейротоксинами.

Разнообразие структурной организации и биологических функций МАП обуславливает широкий спектр возможностей их применения – от фундаментальных исследований до разработки лекарственных средств.

Авторы благодарны за финансовую поддержку Президиуму РАН (программа фундаментальных исследований «Молекулярная и клеточная биология»), Минобрнауки РФ (Госконтракт № П1388), РФФИ (гранты №№ 08-04-00454 и 11-04НАИРИТ (грант № 65348).

Секционные доклады 61

ЗАЩИТНЫЕ ПЕПТИДЫ ИММУНИТЕТА РАСТЕНИЙ (ИЛИ ХИМИЯ И

ГЕНЕТИКА ЗАЩИТНЫХ ПЕПТИДОВ ИММУНИТЕТА РАСТЕНИЙ)

Егоров Ц.А.1, Одинцова Т.И.2 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва Учреждение РАН Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, Москва

E-mail: ego@ibch.ru

Растения образуют множество эффекторных молекул пептидной природы, среди которых выделяют группу защитных пептидов. К ним относятcя: (1) антимикробные пептиды (АМП), способные подавлять рост патогенных микроорганизмов и (2) ингибиторы протеиназ насекомых. Известно несколько семейств АМП, различающихся по пространственной структуре и биологическим свойствам. Геномный анализ показал, что в одном растительном геноме содержатся сотни генов, кодирующих АМП.

В докладе обсуждаются результаты собственных исследований АМП дикорастущих видов цветковых растений, таких как звездчатка (Stellaria media L), ежовник обыкновенный (Echinochloa crusgalli L), одуванчик лекарственный (Taraxacum officinale L), а также пшеница Triticum kiharae – синтетический аллополиплоид, полученный при скрещивании Triticum timopheevii с Aegilops squarrosa. В настоящей работе с использованием различных методов хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией и секвенированием из семян и цветков этих растений выделено и изучено строение нескольких десятков новых АМП.

Среди них обнаружено новое семейство 4-Cys и 10-Cys пептидов, для которых определены 3D структуры и нуклеотидные последовательности кДНК и генов, кодирующих эти АМП. Показано, что 4-Cys пептиды пшеницы кодируются несколькими генами. При этом в составе препробелков идентифицировано по несколько зрелых пептидов с одинаковым 4-Cys мотивом, различающихся по антимикробной активности. Исследованы биологические свойства новых АМП и начаты работы по изучению механизма их действия. Для получения пептидов в препаративных количествах были использованы методы химического синтеза и гетерологической экспрессии синтетических генов, кодирующих эти пептиды, в прокариотической системе (E. coli) с использованием коммерческого вектора. Полученные результаты послужат развитию пептидомики растений и представляют интерес для биотехнологии.

Работа выполнена при финансовой поддержке ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России», ГК № 16.740.11.424, № 16.512.11.2156 и грантами РФФИ №№ 11-04-00190 и 09-04-00250.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

БЕЛКИ ВТОРИЧНОЙ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ РАСТИТЕЛЬНЫХ ВОЛОКОН

Ибрагимова Н.Н., Мокшина Н.Е., Горшкова Т.А.

Учреждение РАН Казанский институт биохимии и биофизики КазНЦ РАН, 420111 Казань, ул. Лобачевского, д. 2/31 E-mail: nibra@yandex.ru Растительные клеточные стенки – самая распространенная на планете органическая субстанция, однако механизм создания этой структуры является почти не затронутой областью исследования. В связи с этим актуальным становится вопрос исследования основных компонентов клеточной стенки и их роли в формировании ее сложнейшей надмолекулярной структуры. Состав белков клеточной стенки желатинозного типа на сегодняшний день охарактеризован крайне слабо, хотя этот тип вторичной клеточной стенки достаточно широко представлен в растительных волокнах. Показано, что благодаря особенностям состава и структуры желатинозные слои вторичной клеточной стенки обладают существенно иными механическими свойствами, чем ксилановые: у них выше прочность на разрыв и гибкость.

Для изучения формирования вторичной клеточной желатинозного типа удобной моделью являются флоэмные волокна льна, одним из преимуществ которого является наличие на стебле «точки слома» – области, выше которой первичные флоэмные волокна интрузивно удлиняются, а ниже – формируют вторичную клеточную стенку. Был разработан протокол для выделения ионно-связанных белков клеточной стенки индивидуального волокна. Белки разделяли с помощью одномерного электрофореза ввиду неэффективности разделения белков клеточной стенки двумерным электрофорезом. Масс-спектры были получены на MALDIвремяпролетном масс-спектрометре Ultraflex (Bruker) с возможностью фрагментации ионов. Для идентификации и установления принадлежности выявленных белков к определенному клеточному компартменту использовались разнообразные методы биоинформатики. Всего было идентифицировано 97 белков, многие из которых определялись как предсказанные, предполагаемые или гипотетические.

При этом 22 белка были идентифицированы как клеточно-стеночные, среди них такие классические белки клеточной стенки как -галактозидаза, пероксидаза, арабиногалактановые белки и др. Полученные данные позволяют приблизиться к пониманию механизмов формирования надмолекулярной структуры вторичной клеточной стенки и роли белков в этом процессе.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 09-04-97038 и гранта Президента РФ по государственной поддержке ведущих научных школ НШСекционные доклады 63

ВАРИАБИЛЬНОСТЬ ТКАНЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ПУЛА

КАК ОТВЕТНАЯ РЕАКЦИЯ ОРГАНИЗМА РЫБ

НА ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

Смирнов Л.П., Суховская И.В.

Учреждение РАН Институт биологии КарНЦ РАН, 185910 Петрозаводск, ул. Пушкинская, 11 E-mail: levps@rambler.ru Существует обоснованное мнение, что пептидный пул клетки может рассматриваться как носитель информационного сигнала о биохимическом статусе ткани и, соответственно, физиологическом состоянии того или иного органа. Следовательно, патологические нарушения в тканях приводят к изменению компонентного состава пулов и изменению суммарного биологического сигнала – количественного и качественного.

Как показали наши исследования, низкомолекулярные экстракты из тканей рыб разделялись методом жидкостной хроматографии на носителе Toyopearl HWS в зависимости от типа ткани на 8 – 14 фракций.

Профили хроматограмм были специфичны для той или иной ткани. Видно большое хроматографическое сходство пулов низкомолекулярных пептидов мускулатуры окуней и карасей и их качественное отличие от таковых печени. Ясно, что более разнообразный фракционный состав печени по сравнению с мускулатурой определяется функциональным многообразием ткани.

Необходимо отметить факт качественных отличий между окунями, отловленными в разных регионах. У рыб, взятых из разных озер Дарвинского заповедника, отсутствовали различия по фракционному составу пептидов с молекулярными массами до 10 кДа с мышцами особей того же вида, выловленных из озер Карелии. Это обстоятельство, на наш взгляд, может свидетельствовать о наличии межпопуляционных различий между окунями в условиях значительной географической разобщенности не только по высокомолекулярным белкам, но и по низкомолекулярным компонентам пептидной природы.

Были выявлены различия по количественному распределению пептидов по фракциям в мышечных экстрактах окуней, выловленных из озер с разным уровнем эвтрофикации. Наблюдалось снижение уровня пептидов во фракциях у рыб из темноводного водоема по сравнению с таковыми из светловодного. Выявлены изменения фракционного пептидного состава, в зависимости от пола и возраста.

Работа выполнена при финансовой поддержке гранта Программы Президента РФ «Ведущие научные школы России» НШ № 3731.2010.4 и Программы Президиума РАН «Биологическое разнообразие» 2009–2011.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ЛАНТИБИОТИКИ – УНИКАЛЬНЫЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ ПЕПТИДЫ:

РАЗНООБРАЗИЕ СТРУКТУРЫ И МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ

Коробов В.П., Полюдова Т.В., Лемкина Л.М.

Учреждение РАН Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН, 614081 Пермь, ул. Голева, 13 E-mail: korobov@iegm.ru Бактерии являются продуцентами огромного количества биологически активных соединений. Особое внимание привлекают небольшие антибактериальные пептиды грамположительных бактерий лантибиотики, содержащие атипичные тиоэфирные аминокислоты – лантионин, 3-метиллантионин и лабионин, благодаря которым в процессах посттрансляционной модификации формируются тиоэфирные связи и прочные внутримолекулярные кольцевые структуры. В составе этих необычных пептидов встречаются также дегидрированные остатки серина и треонина, лизиноаланин, D-аланин, лантионин-сульфоксид, allo-изолейцин и другие редкие соединения. Структурные особенности позволяют выделить две группы лантибиотиков: тип А – протяженные спиралеобразные молекулы с массой 2–5 кДа и тип В – молекулы глобулярной формы с массой около 2 кДа. Суммарный положительный заряд позволяет лантибиотикам связываться с анионными группировками клеточных оболочек бактерий. В то же время, избыток анионных зон на цитоплазматических мембранах способствует продвижению пептидов типа А внутрь и сорбции на внешнем слое мембран с внедрением в липидный матрикс и формированием нерегулируемых каналов и пор, что приводит к гибели клеток. По имеющимся данным лантибиотики облегчают поступление в бактерии различных биологически активных агентов, в частности антибиотиков, в результате чего значительно возрастает эффективность их действия на патогенные бактерии, в том числе, и антибиотикорезистентные штаммы. Показано, что лантибиотики типа В, ингибируя ферменты, препятствуют синтезу пептидогликана путем образования комплекса с липидом II (мерсацидин, актагардин) или подавляя активность фосфолипазы (циннамицин).

Таким образом, уникальные антимикробные пептиды лантибиотики являются великолепным материалом для биотехнологического конструирования новых биологически активных соединений широкого спектра действия.

Работа поддержана грантами РФФИ № 10-04-96086-р_урал_а, Программы президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» № 09-П-4-1019 и УрО РАН № 09-М-14-2002, офи-10-14-12-НАБ.

Секционные доклады 65

ПОДХОД К ВЫДЕЛЕНИЮ ИНТАКТНЫХ МОЛЕКУЛ ТАЙТИНА

Шумилина Ю.В., Вихлянцев И.М., Подлубная З.А.

Учреждение РАН Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино, Московская обл.

E-mail: shjv2000@rambler.ru Тайтин является гигантским белком скелетных и сердечных мышц позвоночных, молекулы которого перекрывают расстояние от М-линии до Z-диска саркомера, формируя третью филаментную систему. Молекула тайтина на 90% состоит из иммуноглобулин- и фибронектин-подобных доменов, имеющих -складчатую структуру. В сердечной мышце животных и человека экспрессируются две изоформы тайтина: короткая N2B (~3000 кДа) и длинная N2BА (~3300 кДа). Показано, что тайтин является одним из важнейших компонентов саркомера поперечнополосатых мышц позвоночных, выполняя множество функций: от участия в сборке саркомера и стабилизации его структуры до регуляции процессов внутриклеточной сигнализации в мышце. Однако структурно-функциональные свойства тайтина in vitro изучены только для его протеолитического фрагмента Т2 (~2000 кДа), поскольку известные методики не позволяли изолировать нативные молекулы тайтина по причине их деградации Са2+-зависимыми протеазами (кальпаинами) в процессе выделения. Мы применили новый способ получения тайтина на основе разработанной ранее методики (Podlubnaya et al., 1989), снижающей содержание ионов кальция в мышце до начала выделения белка. Ранее эта методика впервые позволила сохранить в миофибриллах сердечной мышцы кролика все минорные белки миозиновых нитей (Podlubnaya et al., 1989). Мы использовали эту методику для выделения тайтина из сердечной мышцы млекопитающих. До гомогенизации полоски мышечной ткани (~20мм4мм) инкубировались в растворе, удаляющем ионы Са2+ из мышцы (Podlubnaya et al., 1989), в течение 10–14 суток с частой сменой раствора. Затем тайтин выделяли по методу (Soteriou et al., 1993).

Методом ДСН-гель-электрофореза показано, что выделенные препараты тайтина содержали до 50% интактной N2B-изоформы (в отличие от 3%-ного её содержания в препаратах белка, выделенных по стандартной методике). Методом кругового дихроизма было выявлено увеличение -складчатой структуры в препаратах тайтина, полученных по новой методике, что также свидетельствует о бльшем содержании интактных молекул N2B-изоформы тайтина в препаратах белка. Это первая успешная попытка выделения N2B-изоформы тайтина в количестве, достаточном для дальнейшего исследования её структурно-функциональных свойств.

Работа поддержана грантами РФФИ №№ 09-04-01161, 10-04-00141, грантами ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» Федерального агентства по науке и инновациям, ГК № 02.740.11.0301, ГК № 02.740.11.0710.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ИДЕНТИФИКАЦИЯ БЕЛКОВЫХ КОМПЛЕКСОВ НЕОРГАНИЧЕСКОЙ

ПИРОФОСФАТАЗЫ ESCHERICHIA COLI

Курилова С.А.1, Воробьева Н.Н.2, Родина Е.В.2, Назарова Т.И.1 НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, Ленинские горы Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, Ленинские горы

E-mail: skurilova@mail.ru

Неорганическая пирофосфатаза (РРаза) – один из ключевых ферментов фосфорного обмена. Он катализирует гидролиз пирофосфата до двух фосфат-ионов, тем самым обеспечивая благоприятные термодинамические условия для протекания важнейших биосинтетических процессов. Ранее были идентифицированы около 30 белков, которые могут образовывать комплексы с РРазой в клетке E. сoli, однако дальнейшего развития эти работы не получили.

В настоящей работе методом металлоаффинной хроматографии с использованием 6His-модифицированной РРазы в качестве наживки из экстракта клеток E.

coli были выделены белковые комплексы РРазы. Пять белков, взаимодействующих с РРазой, были идентифицированы с помощью MALDI-TOF масс-спектрометрии: молекулярные шапероны DnaK и GroEL; FbaB, фруктозо-1,6-бисфосфатальдолаза класса I; GadA, L-глутаматдекарбоксилаза; и KduI, 5-кето-4-дезоксиуронатизомераза. Три партнера РРазы, не идентифицированные ранее (FbaB, GadA и KduI), были клонированы, экспрессированы и выделены в двух формах (нативной и с 6His-вставкой). Бинарные взаимодействия этих белков с РРазой были подтверждены обратными экспериментами по образованию комплексов в растворе.

Белки попарно смешивали с РРазой, при этом РРазу брали в нативной форме, а ее предполагаемые партнеры – в 6His-модифицированной. Смесь наносили на колонку с Ni-хелатирующей смолой и отмывали буфером с увеличивающейся концентрацией имидазола. Немодифицированная РРаза выходила вместе с 6His-модифицированными партнерами на 250 мМ имидазола, что подтверждает образование бинарных комплексов.

Чтобы выяснить возможную роль обнаруженных взаимодействий в метаболизме E.coli, было исследовано влияние РРазы на физико-химические свойства FbaB и GadA. Полученные результаты показывают, что РРаза, помимо каталитической функции, может выполнять в клетке E. coli дополнительную роль, стабилизируя эти белки в стрессовых условиях.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (грант № 09-04-00596).

Секционные доклады 67

–  –  –

Химия белков и пептидов.

Методы синтеза, химическая модификация V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИЗОТОПНЫЙ ОБМЕН СО СПИЛЛОВЕР-ВОДОРОДОМ

В ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЯХ

Золотарев Ю.А.1, Дадаян А.К.1, Борисов Ю.А.2, Козик В.С.1, Мясоедов Н.Ф.1 Учреждение РАН Институт молекулярной генетики РАН, 123182 Москва, пл. Ак. Курчатова, 2 Учреждение РАН Институт элементоорганической химии им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва

E-mail: zolya@img.ras.ru

В докладе обобщены данные, посвященные теоретическому и экспериментальному исследованию реакции высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена (ВТКИО) происходящей в органических соединениях под действием спилловер-водорода (СВ). Реакция ВТКИО происходит по одноцентровому синхронному механизму на кислотных центрах бренстедовского типа твердой фазы, образованной органическим веществом, нанесенным неорганический носитель, и высокодисперсным металлом платиновой группы1. ВТКИО является универсальной реакцией, позволяющей получать кратно меченные тритием соединения различных классов. Реакция ВТКИО происходит с практически полным отсутствием рацемизации, что делает эту реакцию ценным препаративным методом.

Обсуждается получение многократно меченных тритием селективных лигандов для рецепторов, пептидов и белков с использованием реакцией ВТКИО. Эти препараты полностью сохраняют физиологическую активность и в течение ряда лет успешно используются в биологических исследованиях в России и за рубежом.

Для реакции ВТКИО с аминокислотами впервые проведен анализ изотопных эффектов реакции с дейтерием и тритием. Было показано, что кинетический изотопный эффект этой реакции составляет 1.2–1.4, что в несколько раз ниже чем для жидкостных реакций переноса протия и дейтерия, составляющий от 3 до 30. Наблюдается хорошее соответствие между экспериментальными данными и результатами квантово-химического расчета.

В области контакта полипептидных субъединиц происходит значительное снижение способности к обмену водорода на СВ, что делает перспективным использование реакции ВТКИО для анализа пептид-пептидных взаимодействий при образовании комплексов в белках. Для меченных тритием и дейтерием органических соединений впервые обнаружены и теоретически исследованы изотопные эффекты в электронных спектрах УФ-поглощения и флюоресценции, что может быть использовано в исследованиях по образованию комплексов с ионами металлов.

Литература

1. Yu.A. Zolotarev, A.K. Dadayan, Yu.A. Borisov, V.S. Kozik, Chemical Reviews, 2010, 110, 5425–5446 Секционные доклады 69

ТВЕРДОФАЗНЫЙ ИЗОТОПНЫЙ ОБМЕН ВОДОРОДА

В ПЕПТИДАХ И БЕЛКАХ, ПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ

ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ

Дадаян А.К.1, Золотарев Ю.А.1, Козик В.С.1, Васьковский Б.В.2, Назимов И.В.2, Мясоедов Н.Ф.1 Учреждение РАН Институт молекулярной генетики РАН, 123182 Москва, пл. Ак. Курчатова, 2 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

E-mail: dadayan@mail.ru

Исследовалась реакция высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена (ВТКИО) происходящая в пептидах и белках под действием спилловер-водорода (СВ). Реакция ВТКИО происходит в твердой смеси, образованной органическим веществом, нанесенным на неорганический носитель, дисперсным металлом платиновой группы и газообразным тритием или дейтерием, при температуре 140–200оС. Изотопный обмен происходит в твердой фазе по одноцентровому синхронному механизму на кислотных центрах бренстедовского типа 1.

Объектами исследования были выбраны пептиды, являющиеся потенциальными лекарственными средствами, такие как гептапептид Семакс, пептидный нейролептик WPYF, брадикинин и циклические пептиды (MW 699-1219). Реакция может быть использована для получения меченых пептидов, содержащих неприродные аминокислоты и гликозилированные фрагменты. Тетрапептид [2H]WPYF, [2H]брадикинин и гормон [2H]мелатонин содержали в среднем 6.8, 5,2 и 10 атомов дейтерия; соответственно. Получены масс спектры равномерно меченных дейтерием пептидов и их пептидных фрагментов. В равномерно меченных дейтерием пептидах изотопная метка распределена по всей молекуле, что открывает возможность создания высоко чувствительного количественного MS-анализа равномерно меченных дейтерием пептидов и всех фрагментов, образующихся при их биотрансформации in vivo и in vitro.

Реакцию ВТКИО изучали в белках на примере гемоглобина, интерферона и человеческого генно-инженерного инсулина. Получили меченный дейтерием инсулин, содержащий в среднем 6 изотопных атомов, для его анализа использовали восстановление S-S-связей, ферментативный гидролиз глутамилэндопептидазой из Bacillus intermedius и ВЭЖХ. Определено распределение изотопной метки в полипептидах белка.

Литература

1. Yu.A. Zolotarev, A.K. Dadayan, Yu.A. Borisov, V.S. Kozik, Chemical Reviews, 2010, 110, 5425–5446 V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ КАРДИОПРОТЕКТОРНОЙ АКТИВНОСТИ

АПЕЛИНА-12 И ЕГО СТРУКТУРНЫХ АНАЛОГОВ

Сидорова М.В., Азьмуко А.А., Палькеева М.Е, Молокоедов А.С., Бушуев В.Н., Шульженко В.С., Пелогейкина Ю.А., Писаренко О.И., Беспалова Ж.Д.

Институт экспериментальной кардиологии ФГУ Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздравсоцразвития РФ, 121552 Москва, 3-я Черепковская ул.

, 15а E-mail: peptide@cardio.ru Актуальной задачей экспериментальной кардиологии является разработка препаратов, снижающих нарушения функции и метаболизма сердца при ишемии и реперфузии. В этой связи большой интерес представляют короткие вазоактивные пептиды – фрагменты адипокина апелина, т.к. система апелин – APJ-рецептор играет важную роль в сердечно-сосудистом гомеостазе.

Наша работа посвящена синтезу и изучению кардиопротекторной активности наименее изученного апелина-12 H-Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Met-Pro-Phe-OH (I) и его аналогов:

H-(NMe)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Phe-OH (II), H-(NMe)Arg-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Phe-NH2 (III), H-Arg(NGNO2)-Pro-Arg-Leu-Ser-His-Lys-Gly-Pro-Nle-Pro-Phe-NH2 (IV), обладающих более высокой протеолитической устойчивостью. Пептиды (I – IV) получали твердофазным методом с использованием Fmoc-технологии, очищали с помощью ВЭЖХ, структуру подтверждали данными 1Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии. Нами было установлено, что в процессе заключительного деблокирования апелина-12 (I) и его аналогов происходит сульфатирование гидроксильной группы остатка Ser с образованием соответствующего сложного эфира. При этом донором сульфогруппы служит сульфо-фрагмент отщепляющихся Pmc-защит остатков Arg. Количество побочного продукта зависит от наличия воды в составе деблокирующей смеси. Кроме того, при синтезе амидов апелина (III, IV) заключительное отщепление защит сопровождается образованием побочного 4-гидроксибензиламида, содержание которого в реакционной смеси колеблется от 20 до 8% (по ВЭЖХ) и также зависит от состава деблокирующей смеси.

Для исследования кардиопротекторных свойств пептидов использована модель тотальной ишемии и реперфузии изолированного перфузируемого сердца крыс. Показано, что введение любого из пептидов в сердце до ишемии достоверно улучшало восстановление интенсивности сократительной функции и показателей насосной функции сердца по сравнению с контролем. Эффективность защиты функции сердца от ишемического и реперфузионного повреждения под действием пептидов увеличивалась в ряду IIVIIIII.

Секционные доклады 71

–  –  –

Биотехнология (конструирование и получение рекомбинантных белков и пептидов) V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ЭКСПРЕССИОННЫЕ СИСТЕМЫ НА ОСНОВЕ ИНТЕИНОВ

В БИОТЕХНОЛОГИИ. ПРИМЕНЕНИЕ И ОГРАНИЧЕНИЯ

Есипов Р.С., Степаненко В.Н., Мирошников А.И.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 E-mail: esipov@ibch.ru Открытие белкового сплайсинга и понимание молекулярных основ этого процесса существенно расширило возможности белковой инженерии. Особенно актуально применение систем на основе интеинов в получении малых белков и полипептидов медицинского назначения, для которых N-концевая аминокислота является критичной, поскольку полностью решается проблема N-концевого формилметионина. В своей работе мы использовали несколько коммерчески доступных векторов, включающих последовательности интеинов для получения целого ряда фармакологически значимых рекомбинантных полипептидов. В результате проделанной работы были созданы лабораторные регламенты и получены опытные образцы следующих полипептидов медицинского назначения: экстендина-4, глюкагона человека, оксинтомодулина человека, гирудина и его аналогов, эпидермального фактора роста человека При всей универсальности, интеиновые системы обладают рядом существенных ограничений: частичное или полное автокаталитическое расщепление, в зависимости от первых аминокислот целевого белка, происходит непосредственно на стадии культивирования штамм продуцента, узкая область рН (6.5–7.3), в которой эффективность автокаталитического расщепления высокая. В ряде случаев такие факторы, как температура и солевой состав не только влияют на эффективность автокаталитического процесса, но и на его специфичность, что приводит к образованию побочных трудноотделимых от целевого полипептида продуктов. Отдельные сложности, в виде химических модификаций, могут возникнуть при масштабировании биотехнологии интеин-опосредованного отделения целевого продукта от гибридного белка.

Резюмируя вышесказанное, можно сделать вывод, что потенциал применения экспрессионных систем на основе интеинов в промышленной биотехнологии высокий, но пока находится на стадии внедрения.

Секционные доклады 73

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ГЛИКОМОДИФИКАЦИИ ПОЛИМЕРОМ

СИАЛОВОЙ КИСЛОТЫ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНКАЗЫ I ЧЕЛОВЕКА,

ЭКСПРЕССИРОВАННОЙ В PICHIA PASTORIS

Бобик Т.В.1, Смирнов И.В.1,2, Пономаренко Н.А.1, Генкин Д.Д., Габибов А.Г.1,2,3 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва Учреждение РАН Институт биологии гена РАН, 119334 Москва

E-mail: bobik_tanya@mail.ru

Муковисцидоз (кистозный фиброз) – системное наследственное заболевание, характеризующееся поражением желез внутренней секреции, тяжёлыми нарушениями функций органов дыхания и желудочно-кишечного тракта. Для улучшения функции дыхания у больных муковисцидозом в настоящее время применяют лекарственный препарат Пульмозим, действующим веществом которого является рекомбинантная дезоксирибонуклеаза I человека, полученная в системе СНО.

Для создания импортозамещающего лекарственного средства Пульмозим нами была получена генетическая конструкция для экспрессии ДНКазы I человека в системе Pichia pastoris, содержащая нуклеотидную последовательность кДНК целевого белка вместе с последовательностью собственного лидерного пептида. В результате селекции рекомбинантных клонов нами был получен штамм-продуцент, эффективно секретирующий рекомбинантную ДНКазу I человека в культуральную среду. Препарат ДНКазы I человека был хроматографически очищен и проведен анализ его ДНК-гидролизующей активности.

Основными недостатками пульмозима является его ограниченная эффективность, являющаяся следствием быстрой энзиматической инактивации препарата в мукоальвеолярном секрете больных. Следствием этого является необходимость частой (ежедневной) ингаляции высоких доз препарата. Показано, что белки, связанные с полимером сиаловой кислоты (ПСК) обладают существенно пониженной иммуногенностью и пониженной чувствительностью к протеолитической деградации, что обуславливает пролонгированный фармакологический эффект. В данной работе были подобраны условия модификации рекомбинатной ДНКазы I с ПСК различной молекулярной массой. Для полученных конъюгатов была разработана система хроматографической очистки. Функциональная активность созданных препаратов оказалось сравнимой с образцом немодифицированной ДНКазы I человека.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

НОВЫЕ БИОСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ГЕМОСОРБЕНТЫ

ДЛЯ ЭФФРЕНТНОЙ МЕДИЦИНЫ

Макаревич Д.А.1, Федоров А.А.1, Голубович В.П.1, Голубович Д.В.2, Кирковский В.В.3 Государственное научное учреждение «Институт биоорганической химии НАН Беларуси», 220041 Минск, ул. Купревича, 5/2, Беларусь ООО «Современные знания», 230023 Гродно, Скидельское шоссе, 18, Беларусь Белорусский государственный медицинский университет, 220116 Минск, пр. Дзержинского, 83, Беларусь

E-mail: golubovich@iboch.bas-net.by

В настоящее время в СНГ достаточно широко используются биоспецифические гемосорбенты, например «Овосорб», для проведения гемосорбции при целом ряде тяжелых заболеваний. В Институте биоорганической химии НАН Беларуси в последнее время создан целый ряд новых биоспецифических сорбентов, обладающих высокой степенью совместимости с цельной кровью и другими биологическим жидкостями.

Созданные сорбенты используют в качестве матрицы модифицированные полимерные соединения – полиэтилен и полипропилен. В качестве лигандов на матрицы иммобилизованы низкомолекулярные синтетические пептиды, аминокислоты и другие вещества. Гемосорбенты получили название «Полимер-Овосорб – ПААГ», «Полимер-Липосорб-ПААГ», «Полимер-АнтиглобулинПААГ», «Полимер-Овосорб – ПЭ», «Полимер-Липосорб-ПЭ», «Полимер-Антиглобулин-ПЭ», «Полимер-Овосорб – ПП», «Полимер-Липосорб-ПП», «ПолимерАнтиглобулин-ПП».

Указанные гемосорбенты можно применяться с целью детоксикации организма при патологических состояниях:

Сепсис Общий гнойный перитонит Острый деструктивный панкреатит Обширные гнойно-некротические процессы мягких тканей Гипотония, обусловленная бактеремическим шоком Ожоговая болезнь Синдром сдавления Синдром включения после реплантации крупных сегментов Синдром отторжения после трансплантации органов и тканей Лучевая болезнь Острые отравления в стадии эндотоксемии Аллергические реакции (отек Квинке, синдром Лайелла) Посттрансфузионные реакции, переливание несовместимой крови и ее компонентов Острая печеночная недостаточность Острая и хроническая почечная недостаточность Бронхиальная астма Системный васкулит Распространенный псориаз Острые и хронические дерматиты Секционные доклады 75

АФФИННЫЙ СОРБЕНТ НА ОСНОВЕ ТРИПТОФИЛТРЕОНИЛТИРОЗИНА

ДЛЯ СВЯЗЫВАНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ КЛАССА G. АСПЕКТЫ

МЕДИЦИНСКОГО И БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ

Левашов П.А., Овчинникова Е.Д., Афанасьева М.И., Фрид Д.А., Азьмуко А.А., Беспалова Ж.Д., Адамова И.Ю., Афанасьева О.И., Покровский С.Н.

ФГУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс»

Минздравсоцразвития РФ, 121552 Москва, ул. 3-я Черепковская, 15а Е-mail: levashov@yahoo.com Аффинные сорбенты для выделения иммуноглобулинов, в частности иммуноглобулинов класса G, из биологических жидкостей широко востребованы в медицине, биотехнологии и биохимии. Данные хроматографические материалы применяются в процедурах терапевтического афереза при лечении ряда аутоиммунных заболеваний. В биотехнологии и биохимии подобные сорбенты необходимы для выделения и очистки различных антител. На сегодняшний день наиболее распространёно использование полисахаридных матриц с иммобилизованными антителами, а также белками А и G из стафилококков и стрептококков. В литературе описаны отдельные попытки создания сорбентов для иммуноглобулинов на основе ароматических аминокислот, ковалентно связанных с нерастворимой матрицей.

Также имеются данные о создании аффинных сорбентов на основе различных разветвлённых органических соединений с двумя и тремя ароматическими кольцами в составе. Ранее нами была предложена конструкция «клешневидных» лигандов с двумя ароматическими кольцами и свободной карбоксильной группой на основе коротких пептидов. Была создана линейка ди- и трипептидов, которые были использованы в качестве лигандов для создания аффинных сорбентов. Полученные сорбенты эффективно и селективно связывали иммуноглобулины G человека и других животных из биологических жидкостей. Оптимизация методов ковалентного присоединения лиганда к нерастворимой матрице через молекулярные мостики различной геометрии позволили достичь высокой сорбционной ёмкости (15– 25мг иммуноглобулинов G на мл сорбента) и стабильности сорбентов в условиях использования и хранения согласно современным требованиям медицины и биотехнологии. Среди полученных сорбентов оптимальные сорбционные характеристики были продемонстрированы для материала на основе триптофилтреонилтирозина, детальному описанию которого посвящена данная работа.

Работа выполнена при финансовой поддержке государственного контракта Федерального агентства по науке и инновациям РФ 02.512.11.2100 от 09.04.2007.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНОГО

ПРЕДШЕСТВЕННИКА НЕЙРОТРОФИНА NT-3 ЧЕЛОВЕКА

Сафина Д.Р.1, Шамонов Н.А.1, Сурин А.М.2, Пинелис В.Г.2, Костров С.В.1 Учреждение РАН Институт молекулярной генетики РАН, 123182 Москва, пл. Ак. Курчатова, 2 Научный центр здоровья детей РАМН, 117296 Москва, Ломоносовский просп., 2/62

E-mail: nauruz@mail.ru

Нейротрофины – гуморальные факторы, отвечающие за рост, развитие и дифференцировку нейронов, а также участвующие в регуляции их апоптоза. Нейротрофины синтезируются в виде пронейротрофинов – протяженных предшественников, содержащих дополнительную пропоследовательность. Роль пропоследовательностей нейротрофинов на настоящий момент не установлена, однако показано, что пронейротрофины функционально активны, а их действие во многих случаях альтернативно действию зрелого белка.

На основе штамма E. coli нами были созданы рекомбинантные продуценты предшественника нейротрофина NT-3 – proNT-3, а также был сконструирован продуцент пронейротрофина с модифицированным сайтом процессинга – proNTРазработаны методы выделения, очистки и фолдинга рекомбинантных нейротрофинов.

Проведен анализ биологической активности полученных нами рекомбинантных предшественников нейротрофина человека с использованием модельной системы диссоциированной культуры спинномозговых ганглиев (СМГ) куриных эмбрионов. Показано, что proNT-3 и proNT-3* не оказывают дифференцирующего действия. В тоже время proNT-3, обработанный трипсином, вызывает образование отростков нейронов в культуре СМГ. Исследовано влияние пронейротрофина proNT-3* на выживаемость нейронов в системе глутаматной эксайтотоксичности, моделирующей ситуацию механического или ишемического повреждения центральной нервной системы. Показано, что пронейротрофин человека proNT-3* снижает выживаемость нейрональных клеток в данной модельной системе.

Работа поддержана Программами фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» и «Фундаментальные науки – медицине», а также РФФИ (грант № 09-04-00870).

Секционные доклады 77

НЕЙТРАЛИЗУЮЩИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ КОМПОНЕНТОВ

ЭКЗОТОКСИНА BACILLUS ANTHRACIS

Панина А.А.1, Алиев Т.К.2, Топорова В.А.1, Шемчукова О.Б.3, Бикетов С.Ф.4, Долгих Д.А., Свешников П.Г.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва АО Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения, Москва ФГУП Государственный научный центр прикладной микробиологии, Оболенск, Московская обл.

E-mail: panina@mx.ibch.ru

Среди широкого спектра различных инфекционных заболеваний особое место занимает сибирская язва. Данное заболевание, вызываемое возбудителем Bacillus anthracis, широко распространено во многих странах Азии, Африки и Южной Америки. Очаги сибирской язвы есть и на территории России. Кроме того, по оценкам экспертов в области биобезопасности, сибирская язва, наряду с чумой и оспой, также является наиболее мощным и доступным инфекционным агентом для биотерроризма.

Системная токсемия является основной причиной смертности при данном заболевании. Высокая степень морбидности при поражении бациллами сибирской язвы во многом вызвана тем фактом, что элиминация болезнетворных микробов при помощи терапии антибиотиками не способна значительно понизить уровень интоксикации организма человека. Эффективная терапия при заболевании сибирской язвой должна сочетать антибиотикотерапию и нейтрализацию сибиреязвенных токсинов.

Создана панель гибридом, продуцирующих высокоэффективные нейтрализующие моноклональные антитела против протективного антигена (ПА) и летального фактора (ЛФ) B. anthracis. В тестах на мышах было показано, что введение антител против ПА и ЛФ способствуют повышению выживаемости до 80–90 процентов. Из гибридомных линий, продуцирующих моноклональные мышиные антитела, выделена тотальная РНК, на основе которой создана кДНК. С помощью специфичных праймеров амплифицированы вариабельные домены легких и тяжелых цепей антител, определена их первичная структура. Создан ряд искусственных генов, кодирующих химерные антитела в форме Fab-фрагментов, с использованием константных участков человеческих иммуноглобулинов.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России».

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

МИКРОБНЫЕ СООБЩЕСТВА ВЕЧНОЙ МЕРЗЛОТЫ КАК ИСТОЧНИК

НОВЫХ ГЕНОВ ДЛЯ БИОТЕХНОЛОГИИ

Петровская Л.Е.1, Лукашев Е.П.2, Новотоцкая-Власова К.А.3, Крюкова Е.А.1, Сычев С.В.1, Спирина Е.В.3, Ривкина Е.М.3, Гиличинский Д.А.3, Долгих Д.А.1, 1,2 Кирпичников М.П.

Учреждение РАН Институт биооpганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва Учреждение РАН Институт физико-химических и биологических проблем почвоведения РАН, Пущино, Московская обл.

E-mail: lpetr65@yahoo.com

Вечная мерзлота занимает более 50% территории России и представляет собой породы, находящиеся в мерзлом состоянии десятки и сотни тысяч лет. Обитающие в ней бактерии, археи и низшие эукариоты адаптированы к различным неблагоприятным факторам, включая пониженную температуру, низкую активность воды, ограниченную доступность питательных веществ и другие. Идентификация и изучение белков представителей микробных сообществ вечной мерзлоты способствует исследованию механизмов адаптации на молекулярном уровне, а также получению материалов с новыми характеристиками для биотехнологического использования.

Нами проведено клонирование гена бактериородопсина Exiguobacterium sibiricum (ESR) и проведено исследование функциональных свойств рекомбинантного белка. Установлено, что при поглощении света в суспензии ESR-содержащих липосом наблюдается выброс протонов в среду, таким образом, полученный нами белок является новым представителем семейства протонных насосов.

Ферменты, выделенные из микроорганизмов-экстремофилов, представляют значительный интерес для биотехнологии, поскольку обладают активностью в различных диапазонах температуры, рН и т.д. Нами проведено исследование липолитической системы Psychrobacter сryohalolentis, в геноме которого обнаружен ряд генов, кодирующих липазы и эстеразы. Для трех из них сконструированы системы экспрессии в E. coli. Характеристика свойств полученных белков демонстрирует наличие высокой каталитической активности при низкой температуре, а также относительно широкого диапазона температурной стабильности.

Работа проводится при финансовой поддержке гранта РФФИ № 10-05-00079, программ РАН «Молекулярная и клеточная биология», «Происхождение биосферы и эволюция геобиологических систем» и Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009– 2013 г.

Секционные доклады 79

–  –  –

Физико-химические и компьютерные методы исследования.

Пространственная структура и динамика.

Биоинформатика V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТРУКТУРЫ ДВУХДОМЕННОГО N-КОНЦЕВОГО

ФРАГМЕНТА АРХЕЙНОГО РИБОСОМНОГО БЕЛКА L10(Р0)

И УТОЧНЕНИЕ КРИСТАЛЛОГРАФИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ

АРХЕЙНОЙ РИБОСОМЫ

Гарбер М.Б.1, Кравченко О.В.1, Митрошин И.В.1, Пиндл В.2, Никонов С.В.1 Учреждение РАН Институт белка РАН, 142290 Пущино, Московская обл., ул. Институтская, 4 Biocenter, Division of Medical Biochemistry, Innsbruck Medical University, Fritz-Pregl-Strasse 3, 6020, Австрия Рибосомный белок L10 в бактериях и его аналог белок Р0 в археях и эукариотах формируют основание функционально-важного бокового выступа большой рибосомной субчастицы. Этот рибосомный выступ (L12-выступ у бактерий, Р1-выступ в археях и P1/P2-выступ у эукариот) обладает большой подвижностью, и по этой причине его структура не определяется в кристаллах интактных рибосомных частиц. Белки, формирующие данный выступ, существенно различаются по своей структуре в разных доменах жизни: белки архей и эукариот гомологичны между собой, но отличаются от своих бактериальных аналогов. Эти белки определяют специфическое узнавание факторов элонгации, которые у бактерий отличаются по структуре от аналогичных факторов архей и эукариот. Нами недавно была определена структура двухдоменного N-концевого фрагмента белка L10(Р0) из археи Methanococcus jannaschii с разрешением 1,6 [1]. Встраивание определенной нами структуры в модель архейной рибосомы уточняет структуру основания Р1-выступа этой рибосомы и показывает каким образом второй домен белка L10(Р0), который отсутствует в бактериальном белке L10, может дискриминировать связывание бактериальных факторов элонгации к рибосоме.

Продолжением этих исследований является работа по кристаллизации и определению структуры комплекса между вышеописанным двухдоменным фрагментом белка Р0 (Р0NTF) и специфическим участком 23S рРНК.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российской академии наук, Российского фонда фундаментальных исследований (грант № 11-04-00327а) и Программы фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология».

Литература

1. O. Kravchenko, I. Mitroshin, S. Nikonov, W. Piendl and M. Garber. (2010). Structure of a two-domain N-terminal fragment of ribosomal protein L10 from Methanococcus jannaschii reveals a specific piece of the archaeal ribosomal stalk. J. Mol. Biol., 399: 214–220.

Секционные доклады 81

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ ПЕПТИДОВ

НА ИХ ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ МИШЕНИ В РАСТВОРЕ И В МЕМБРАНЕ:

ВОЗМОЖНОСТИ КОМПЬЮТЕРНОГО ЭКСПЕРИМЕНТА

Волынский П.Е.1, Полянский А.А.1, Логинов П.А.2, Озеров И.В.3, Балицкая Е.Д.3, Ефремов..1 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 Московский физико-технический институт (государственный университет), 141700 Долгопрудный, Московская обл., Институтский пер., 9 МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, Ленинские горы

E-mail: efremov@nmr.ru

Цель работы – установление факторов, определяющих взаимодействие пептидов с водорастворимыми и мембранными белками, а также с липидным бислоем клеточных мембран. Методы компьютерного моделирования применены к поиску белков -потенциальных мишеней действия коротких регуляторных пептидов (на примере глипролинов) – и к анализу молекулярных механизмов связывания мембрано-активных и трансмембранных пептидов с липидными и белковыми компонентами мембран клеток бактерий и эукариот. Результаты используются для рационального компьютерного конструирования биологически активных молекул с заданными свойствами. Для решения указанных задач разработан информационно-вычислительный комплекс, реализующий согласованное применение современных методов молекулярного моделирования [1–4]. Создан ряд мутантных форм изучаемых пептидов, обладающих «улучшенными» характеристиками биологической активности. Предложен вычислительный подход, позволяющий повысить эффективность молекулярного докинга белок-лиганд. Метод основан на концепции комплементарности гидрофобных свойств взаимодействующих молекул и реализован в виде пакета программ PLATINUM с веб-интерфейсом [4] (http://model.nmr.ru/platinum).

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований, программы Президиума РАН «Основы фундаментальных исследований нанотехнологий и наноматериалов», Министерства образования и науки РФ, гранта Президента МК-8439.2010.4.

Литература

1. Efremov R.G., et al. (2007). Curr. Med. Chem. 14, 393–415.

2. Volynsky P.E., et al. (2010). Physical Biology 7, 1–15.

3. Polyansky.., et al. (2011). Adv. Prot. Chem. Struct. Biol. 83, 129–161.

4. Pyrkov T.V., et al. (2009). Bioinformatics. 25, 1201–1202.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ВЫРАЩИВАНИЕ КРИСТАЛЛОВ БЕЛКОВ НА МЕЖДУНАРОДНОЙ

КОСМИЧЕСКОЙ СТАНЦИИ МЕТОДОМ ВСТРЕЧНОЙ ДИФФУЗИИ

Куранова И.П., Ковальчук М.В.

Учреждение РАН Институт кристаллографии им. А.В. Шубникова РАН, 119333 Москва, Ленинский просп., 59 E-mail: inna@ns.crys,ras.ru; koval@ns.crys.ras.ru Для рентгеновского исследования пространственной структуры белков при высоком разрешении необходимы кристаллы высокого дифракционного качества. Степень совершенства кристалла в значительной степени зависит от условий роста, в том числе от характера транспорта вещества к растущему кристаллу.

При единичной гравитации транспорт молекул к растущему кристаллу осуществляется посредством конвекционных потоков, в то время как более совершенные кристаллы белков вырастают в условиях диффузионного транспорта, который преобладает в микрогравитации. Поэтому выращивание кристаллов белков в невесомости используется, чтобы улучшить дифракционное качество кристаллов.

Ряд экспериментов по выращиванию кристаллов белков проведен на Международной космической станции в кристаллизационном боксе Kibo японского космического агентства JAXA методом встречной диффузии, описанным в [1].

Предварительные наземные эксперименты по первоначальному подбору и оптимизации условий также проведены методом встречной диффузии в капиллярах.

Осадитель вводили в заполненный раствором белка капилляр через слой геля, в результате чего по длине капилляра устанавливались градиент концентрации белка и градиент концентрации осадителя. Кристаллы, появлявшиеся на разных расстояниях от начала капилляра, росли в разных условиях и отличались по размеру и качеству.

Методом встречной диффузии в невесомости были выращены кристаллы фосфопантетеин аденилилтрансферазы Mycobacterium tuberculosis и ее комплексов с функциональными лигандами, тимидинфосфорилазы E. сoli в комплексе с ингибиторами, ряд мутантных форм карбоксипептидазы Т из Thermoactinomyces vulgaris. От выращенных кристаллов на синхротроне SРring8 cобраны дифракционные наборы. Выращенные в невесомости кристаллы дифрагировали до более высокого разрешения, чем кристаллы, полученные в наземных условиях.

Эксперименты проведены при участии представителей японского космического агентства JAXA.

Работа выполнена при финансовой поддержке ЦНИИМаш Роскосмоса.

Литература

1. Tanaka, H., Inaka, K., Sugiyama, S., Takahashi, S., Sano, S., Sato, M., Yoshitomi, S. J. Synchrotron.

Rad. (2004). 11, 45–48 Секционные доклады 83

НОВЫЕ ПОДХОДЫ В РЕШЕНИИ ЗАДАЧ ПРОТЕОМИКИ,

ОСНОВАННЫЕ НА ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПОЛУПРОВОДНИКОВЫХ

ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ НАНОКРИСТАЛЛОВ (КВАНТОВЫХ ТОЧЕК)

Олейников В.А.1, Генералова А.Н.1, Мочалов К.Е.1, Артемьев М.В.2, Сизова С.В.1, Зубов В.П.1, Набиев И.Р.3 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 Институт физико-химических проблем, Белорусский государственный университет, Минск, Беларусь Университет города Реймс, Шампань-Арден, Реймс, Франция Использование уникальных свойств полупроводниковых флуоресцентных нанокристаллов (квантовых точек) позволяет реализовать новые подходы к созданию аналитических систем для одновременной детекции множества объектов. Благодаря высокой яркости, нанокристаллы легко регистрируются как индивидуальные объекты с помощью обычного микроскопического оборудования; они чрезвычайно устойчивы к фототушению; обладают уникальными возможностями для мультиплексирования. В случае выбора в качестве объектов белков и пептидов, это позволяет создать новую инструментальную базу для решения задач протеомики и пептидомики. Основой нового подхода является формирование конъюгатов (гибридов), включающих одну или несколько квантовых точек и присоединенных с ними распознающих молекул.

К настоящему времени, нами разработаны и синтезируются три типа конъюгатов.

(1) Единичные нанокристаллы с присоединенными к ним распознающими молекулами, в качестве которых использованы полноразмерные антитела или их фрагменты.

(2) Полимерные микрочастицы, содержащие один или несколько нанокристаллов. Заключение нанокристаллов в полимерную матрицу позволяет более надежно изолировать нанокристаллы от окружающей среды и применять более простые способы присоединения распознающих молекул к поверхности микрочастиц.

(3) Полимерные микрочастицы, спектрально кодированные флуоресцентными нанокристаллами, являющиеся основой создания «жидких биочипов» для мультиплексной детекции белков.

Продемонстрировано использование эффекта FRET (Ферстеровский резонансный перенос энергии) в аналитических системах, содержащих квантовые точки.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ и ФЦП Министерства образования и науки РФ.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

СВОЙСТВА ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ АЦИЛОВ ФОСФОЛИПИДОВ

И ЛИПИД-БЕЛКОВЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ

(КОМПЬЮТЕРНОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ)

Рабинович А.Л., Рипатти П.О.

Учреждение РАН Институт биологии КарНЦ РАН, 185910 Петрозаводск, ул. Пушкинская, 11 E-mail: rabinov@krc.karelia.ru В состав биологических мембран входит множество компонентов. Одна из фундаментальных проблем – установление на молекулярном уровне связей между структурой, свойствами и функционированием столь сложной системы. Частью общей проблемы является изучение этих вопросов для молекул липидов, которые, образуя «матрицу» мембраны, выполняют и множество других функций. Так, полиненасыщенными цепями обогащены липидные молекулы, непосредственно связанные с интегральными белками. В данной работе методами компьютерного моделирования проведено изучение и сравнение свойств углеводородных цепей разной степени ненасыщенности. Показано, что внедрение в насыщенную углеводородную цепь одной двойной связи cis и последующее увеличение количества таких связей постепенно меняет свойства цепи. При максимально возможной степени ненасыщенности, когда количество атомов углерода фиксировано и все двойные связи являются метиленпрерывающимися, цепь обладает особенными, уникальными физическими свойствами: в ней наиболее велика степень ориентационного разупорядочения простых связей C–C, соседних с двойными C=C; наиболее велики угловые флуктуации связей C–H во всех CH2-группах вдоль по цепи, и пространственные флуктуации атомов углерода двойных связей. При изменении температуры среды характеристики полиненасыщенной цепи в целом и каждого ее сегмента в отдельности остаются наиболее стабильными по сравнению с характеристиками цепей иного строения. Если липиды с полиненасыщенными цепями в биомембранах преимущественно расположены в аннулярных слоях разных белков, то специфические свойства полиеновых цепей могут обеспечивать поддержание надлежащей конформационной подвижности этих белков. Этим фундаментальным механизмом можно объяснить тот факт, что докозагексаеновая кислота и другие полиненасыщенные ацилы оказывают эффективное влияние на биохимические процессы и разнообразные болезни, которые кажутся не связанными между собой.

Работа поддержана РФФИ (проект № 10-03-00201а), программой Президента РФ «Ведущие научные школы» НШ-3731.2010.4 и Swedish Institute Visby programme 00961/2008, 00675/2009.

Секционные доклады 85

ЦИКЛИЧЕСКИЕ СТРУКТУРЫ ПОЛИПЕПТИДНОЙ ЦЕПИ

И ИХ РОЛЬ В СВОРАЧИВАНИИ БЕЛКОВ

Ефимов А.В.

Учреждение РАН Институт белка РАН, 142290 Пущино, ул. Институтская, 4, Московская обл.

E-mail: efimov@protres.ru Замкнутые структуры различного типа широко распространены в белках на всех уровнях структурной организации. По-видимому, высокая частота встречаемости замкнутых структур является следствием их более высокой стабильности и большей кооперативности по сравнению с открытыми аналогами. На уровне супервторичных структур замыкание происходит тремя основными способами – с помощью суперспиралей, расщепленных -шпилек и SS-мостиков. Вторичное замыкание -шпилек, трехтяжевых -листов и -единиц представляет особый интерес, поскольку приводит к образованию структурных мотивов с уникальными укладками цепи и определенной хиральностью. Структурные мотивы с уникальными укладками могут быть зародышами при сворачивании или стартовыми структурами при моделировании белков. Моделирование сворачивания белков с помощью структурных деревьев показывает, что рост структур идет преимущественно по тем путям, которые ведут к образованию замкнутых структур.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (проект № 10-04-00727) и Федерального агентства по науке и инновациям (№ 02.740.11.0295).

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

СТРУКТУРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ТРАНСМЕМБРАННЫХ

ГЛИКОПРОТЕИНОВ ОБОЛОЧЕЧНЫХ ВИРУСОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ

МЕТОДОВ ПРОТЕОЛИЗА, MALDI-TOF МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ

И МОЛЕКУЛЯРНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ

Кордюкова Л.В.1, Серебрякова М.В.2, Полянский А.А.3, Veit M.4 НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, Ленинские горы, 1-40 ГУ НИИ физико-химической медицины Росздрава, 119992 Москва, ул. Малая Пироговская, 1а Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 Immunology and Molecular Biology, Veterinary Medicine Faculty, Free University, Philippstr. 13, 10115 Berlin, Germany

E-mail: kord@belozersky.msu.ru

Структурное исследование мембранных белков и пептидов методом РСА затруднено. Мы разработали альтернативный подход для изучения структурных особенностей гемагглютинина (НА) вируса гриппа и сливающих белков других оболочечных вирусов, включающий протеолиз гликопротеинов в составе вирионов или мицелл, экстракцию заякоревающих сегментов в органическую фазу и анализ полученных гидрофобных сегментов методом MALDI-TOF MS анализа.

НА вируса гриппа – белок I типа, включает 1 трансмембранный (ТМ) домен и организован в мембране в виде гомотримеров. Три высоко консервативных остатка цистеина в С-концевой области НА вируса гриппа А ацилированы высшими жирными кислотами. Различают 16 антигенных подтипов вируса гриппа А, которые эволюционно разделены на 2 группы: группу 1 и группу 2.

Мы обнаружили: 1) НА вируса гриппа А ацилирован не только пальмитатами, но и стеаратами, которые связаны исключительно с остатком цистеина, расположенном на границе ТМ и цитоплазматического доменов. Данные подтверждены MS/MS и анализом серии мутантов с одиночными заменами сайтов ацилирования;

2) та же приоритетная локализация стеарата на ТМ-цистеине обнаружена у НА вируса гриппа В, HEF-белке вируса гриппа С, G-белке вируса везикулярного стоматита, F-белке вируса болезни Ньюкасла, Е1 и Е2 белках вируса леса Семлики;

3) обнаружена разная степень ассоциации ТМ-доменов в составе гомотримеров у представителей групп 1 и 2 НА вируса гриппа А. Отсутствие гидролиза ферментами ТМ-доменов в составе мицелл HA из группы 2 согласуется с их более плотной гомотримерной ассоциацией в моделях, полученных методами молекулярного моделирования.

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ № 09-04-01160а, РФФИ-ННИО 10-04-91333-а, гранта Президента РФ MK-8439.2010.4.

Секционные доклады 87

ВЛИЯНИЕ АКТИН-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ

НА ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТЬ МОНОМЕРНОГО G-АКТИНА

Левицкий Д.И.1,2, Пивоварова А.В.1, Чеботарева Н.А.1 Учреждение РАН Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН, 119071 Москва, Ленинский просп., 33 НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

E-mail: Levitsky@inbi.ras.ru

Используя метод дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК), мы исследовали влияние актин-связывающих белков (кофилина, твинфилина и профилина) на характер тепловой денатурации мономерного G-актина. Цель этих экспериментов состояла в том, чтобы выяснить роль нуклеотид-связывающей щели между двумя доменами актина в стабилизации его молекулы. Ранее на основании результатов многочисленных исследований методом ДСК нами было высказано предположение о том, что стабильность G-актина во многом определяется именно состоянием его междоменной нуклеотид-связывающей щели (Levitsky et al., (2008) FEBS J. 275, 4280–4295; Pivovarova et al. (2010) FEBS J.

277, 4280–4295):

переход ее в более «открытое» состояние снижает термостабильность актина, а переход в более «закрытое» состояние – увеличивает термостабильность. Из литературы было известно, что актин-связывающие белки могут оказывать совершенно противоположное влияние на состояние нуклеотид-связывающей междоменной щели молекулы актина (например, кофилин и твинфилин «закрывают» щель, а профилин, напротив, «открывает» ее). Используя метод ДСК, мы показали, что кофилин и твинфилин заметно увеличивают термостабильность мономерного Gактина. При этом обнаружена и заметная разница между этими белками: кофилин стабилизирует G-актин в разных его состояниях (как АТP-актин, так и АDP-актин), значительно смещая кривую теплопоглощения в сторону более высокой температуры, тогда как твинфилин образует прочные комплексы с АТP-G-актином, не оказывая существенного влияния на его термостабильность, но при этом заметно стабилизирует АDP-G-актин. Напротив, профилин заметно дестабилизирует Gактин, то есть значительно снижает его термостабильность, сдвигая кривую теплопоглощения в сторону более низкой температуры (на 3–9оС в зависимости от молярного отношения профилин/актин). Таким образом, нам удалось подтвердить высказанное ранее предположение о том, стабильность (термостабильность) актина в значительной степени определяется состоянием нуклеотид-связывающей щели – более: «открытым» или более «закрытым».

Работа выполнена при поддержке РФФИ и Программы фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология».

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ВЛИЯНИЕ ТОЛЩИНЫ МЕМБРАНЫ НА СТРУКТУРУ ДИМЕРА

ТРАНСМЕМБРАННЫХ ФРАГМЕНТОВ FGFR3

Волынский П.E., Фахрутдинова Г.Н., Полянский А.А., Ефремов Р.Г.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 E-mail: volynski@yandex.ru Рецепторные тирозин киназы (РТК) играют большую роль в метаболизме клеток, отвечая за их пролиферацию и дифференциацию. Эти белки состоят из трех доменов: внеклеточного, цитоплазматического и трансмембранного домена, который представляет собой трансмембранную альфа-спираль. Активация РТК происходит при связывании лигандов в димерном состоянии рецептора. Трансмембранные домены РТК определяют структурную организацию димеров и регулируют их стабильность. Более того, для ряда РТК показано, что их трансмембранные фрагменты имеют различную структуру на разных этапах функционирования белка (например, активная и пассивная формы). Одним их важных факторов, который влияет на структуру и заселенность различных форм димера является липидный состав мембраны. К примеру, показано, что некоторые РТК образуют активные димеры только в составе липидных микродоменов (рафтов).

Эта работа посвящена компьютерному моделированию и характеризации возможных моделей димера трансмембранных фрагментов рецептора FGFR3. Комбинированное использование различных подходов молекулярного моделирования позволило выделить ограниченное число моделей, которые могут рассматриваться как возможные структуры димера в различных состояниях белка (активая, пассивная промежуточная формы). Ранжирование предсказанных моделей и исследование влияния состава мембраны на структурные предпочтения было осуществлено посредством расчета свободной энергии димеризации в различных модельных мембранах. Согласно проведенным исследованиям, липидный состав влияет на структурные предпочтения димера трансмембранных фрагментов FGFR3: одни модели предпочтительно формируются в толстых бислоях, в то время как другие реализуются в тонких мембранах. Таким образом, проведенные исследования позволяют получить важную информацию, которая способствует пониманию функционирования РТК.

Работа выполнена при финансовой поддержке программы фундаментальных исследований Президиума РАН «Молекулярная и клеточная биология» и грантов РФФИ. При проведении расчетов использовались вычислительные ресурсы суперкомпьютера СКИФ МГУ «Чебышёв» и МСЦ РАН.

Секционные доклады 89

СТРУКТУРНЫЕ И ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ

БЕЛКОВ ПОТЕНЦИАЛ-ЗАВИСИМЫХ КАНАЛОВ ЧЕЛОВЕКА

С ЛИГАНДАМИ (БЛОКАТОРАМИ)

Шайтан К.В., Соколова О.С., Кирпичников М.П.

Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, 119991 Москва, Ленинские горы, 1, стр.12 E-mail: shaytan49@yandex.ru Мембранные белки составляют около 30% всех белков организма, при этом около половины из них – это белки-переносчики и ионные каналы. Ионные каналы контролируют движение ионов через клеточную мембрану, таким образом, создавая и регулируя электрическую активность клетки. Потенциал-зависимые калиевые каналы (Kv) представляют собой наиболее обширную и разнообразную группу ионных каналов. Мутации в генах, связанные с активностью этих каналов, проводят к тяжелым наследственным заболеваниям. Структурные исследования Kv каналов представляют большой интерес, так как каналы могут быть потенциально использованы в качестве мишеней для лекарственных агентов.

В данной работе методами электронной микроскопии белковых молекул впервые получены трехмерные структуры каналов K10.2wt, Kv2.1CTA и Kv2.1C с разрешением 25. Для интерпретации полученных структур было использовано моделирование мембранной части канала Kv2.1 по гомологии c Kv1.2 в открытой и закрытой конформации. Показано, что модель открытого канала хорошо соответствует трехмерной структуре канала Kv2.1C, в то время как модель закрытого канала сходна с трехмерной структурой канала Kv2.1CTA. Эти результаты подтверждают ранее высказанную гипотезу о том, что видимая перегруппировка субдоменов каналов Kv2.1C и Kv2.1CTA может являться следствием изменения активационного состояния канала при удалении C-концевых доменов, что также согласуется с данными других авторов.

Методами молекулярной динамики исследованы взаимодействия ряда лигандов с ионными каналами, помещенными в липидный бислой, а также ионная проводимость потенциал-зависимого калиевого канала в полноатомной модели на траекториях более 100нс. Продемонстрированы эффекты межионного взаимодействия в канале на его проводимость.

Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ и Минобрнауки.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ПОИСК НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ПЕПТИДНЫХ АНАЛОГОВ ФАКТОРОВ

РОСТА И ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК

Голубович В.П.1, Шутова И.В.1, Голубович Д.В.2, Грибовская О.В.1, Коваленко А.П.3 Государственное научное учреждение «Институт биоорганической химии НАН Беларуси», 220041 Минск, ул. Купревича, 5/2, Беларусь ООО «Современные знания», 230023 Гродно, Скидельское шоссе, 18, Беларусь ООО Научно-исследовательский лечебно-реабилитационный центр «Институт биологической медицины», 109147 Москва, ул. Марксистская, 34/7

E-mail: golubovich@iboch.bas-net.by

Ранее нами разработана математическая модель, на основании которой создан прогностический комплекс для осуществления конструирования функциональных сайтов глобулярных белков, реализованный в виде компьютерной программы.

Данный комплекс позволяет проводить анализ поверхности исследуемых белков и давать сведения о местоположении на поверхности исследуемой глобулы структур. Исходными данными для работы комплекса служат сведения о первичной и пространственной структуре, исследуемых белков. Компьютерное моделирование позволяет идентифицировать участки, находящиеся на поверхности глобулы белка и взаимодействующие с соответствующими рецепторами на оболочке стволовых клеток. На основе полученных данных осуществлялся прогноз аналогов функциональных сайтов в виде олигопептидных соединений размером от 4 до 6 аминокислотных остатков.

С помощью комплекса были изучены некоторые факторы роста и дифференцировки стволовых клеток (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, фактор роста гепатоцитов HGF, фактор роста сосудистого эндотелия VEGF и основной фактор роста фибробластов bFGF, фактор стволовых клеток SCF и другие). Дан прогноз низкомолекулярных пептидных аналогов этих факторов, полностью сохраняющих дифференцирующую активность исследуемых белков. Полученные результаты подтверждены последующим синтезом и сравнительным испытанием на искомую биологическую активность аналогов с сопоставлением с природными факторами роста.

Секционные доклады 91

БИОИНФОРМАЦИОННЫЙ ПОИСК БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ПОЛИПЕПТИДОВ В ТРАНСКРИПТОМАХ

Козлов С.А.

Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10 E-mail: serg@ibch.ru Анализ еxpressed sequence tags (ESTs) является современным эффективным методом, применяемым в различных областях молекулярной биологии. Особенностью метода является получение и секвенирование большого числа отдельных клонов, количество которых может варьироваться в пределах от нескольких сотен до десятков тысяч. Стандартный процесс работы с EST включает этапы обработки биоматериала, получение клонов, создание библиотеки и несколько этапов ее анализа от группировки в контиги до аннотации и опубликования результатов. Использование контигов снижает эффективность поиска закодированных в банке структур коротких биологически активных полипептидов, так как эффективность их сравнения заметно ниже чем поиск гомологии между белками. При этом такие молекулы представляют огромный практический интерес для генерации лекарственных средств нового поколения.

В EST банках ядовитых животных содержатся целые комбинаторные библиотеки, где компоненты могут отличаться друг от друга точечной мутацией или делецией всего одного аминокислотного остатка, приводящей к значительному изменению специфичности биологического действия. Для обнаружения активных полипептидов вместо аннотации всего банка предлагается доставать только необходимую структурную информацию соответствующую поисковому критерию.

Предполагаемый критерий для выборки нужных последовательностей, в каждом отдельном случае формируется на основе структурных особенностей искомых полипептидов.

Для формирования запросов в базу EST и поиска структурного родства предлагается использовать single residue distribution analysis. С помощью которого при анализе банка EST морской анемоны Anemonia viridis, используя 14 различных поисковых критериев, было обнаружено 89 биологически активных полипептидов с предположительно антимикробной функцией и модулирующей активностью на различные типы ионных каналов.

Работа выполнена при финансовой поддержке Президиума РАН (программа «Молекулярная и клеточная биология») и РФФИ (грант № 11-04-00706-а).

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

РОЛЬ НЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ МЕЖМОЛЕКУЛЯРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ

И ФАЗОВЫХ СОСТОЯНИЙ РАСТВОРА В РЕГУЛЯЦИИ СТРУКТУРНОЙ

ДИНАМИКИ БЕЛКОВ

Рожков С.П., Горюнов А.С.

Учреждение РАН Институт биологии КарНЦ РАН, 185610 Петрозаводск, ул. Пушкинская, 11 E-mail: rozhkov@krc.karelia.ru Повышенное внимание, которое уделяется в последнее время исследованию феномена и механизмов неспецифического взаимодействия заряженных белков, приводящего к фазовому переходу типа жидкость-жидкость и образованию метастабильных белковых кластеров [1], обусловлено их ролью в механизмах биологических процессов от кристаллизации белков до фибриллогенеза белков и амилоидных патологий. В то же время, влияние образования кластеров и связанной с этим специфики растворимости белков на динамическое и функциональное состоянии макромолекул до сих пор не рассматривалось. Методом ЭПР спиновых меток и зондов исследовались структурно-динамические изменения молекул лизоцима и альбумина в широком диапазоне изменения концентрации солей и температуры. Сопоставление этих изменений с фазовыми диаграммами растворов белка показало, что области закритических фазовых переходов на фазовой диаграмме соответствуют состояния белка с повышенной гибкостью структуры и увеличенной доступностью центров сорбции для ионов электролита в белковой глобуле. Это позволяет предположить возможный механизм формирования амилоидных фибрилл, который основан на том, что в области бинодали фазовой диаграммы, где существует квазиравновесие метастабильных белковых кластеров плотной фазы и разбавленной фазы раствора белка, должна наблюдаться десорбция ионов электролита с молекул белка, формирующих кластер. В противном случае значительный рост электростатической свободной энергии белковой глобулы может приводить к ее денатурационным изменениям с последующим развитием полимеризационных и/или агрегационных процессов. Показано, что гомогенная нуклеация полимеров амилоидных или прионных белков является двухступенчатым процессом [2]. Первым шагом является обратимый фазовый переход типа жидкость-жидкость, создающий высококонцентрированного аморфного предшественника для последующих процессов полимеризации.

Литература

1. Rozhkov S.P., Goryunov A.S. Biophys.Chem. (2010) 151 (1-2). P.22-28.

2. Galkin et al. Biophys.J. (2007) 93. P.902 Секционные доклады 93

КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЕ ZN-ТФП В ХЛОРОФОРМЕ

КАК МОДЕЛЬ ИЗУЧЕНИЯ МЕХАНИЗМОВ ФЕРМЕНТАТИВНЫХ

ПРОЦЕССОВ С УЧАСТИЕМ МЕТАЛЛОПОРФИРИНОВ

В ВОДНЫХ И ОРГАНИЧЕСКИХ СРЕДАХ

Андреев В.П.1, Соболев П.С.1, Зайцев Д.О.1, Романова М.И.1, Ларкина Е.А.2, Ткачевская Е.П.2 Петрозаводский государственный университет, 185910 Петрозаводск, пр. Ленина, 33 Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова, 119571 Москва, просп. Вернадского, 86

E-mail: andreev@psu.karelia.ruE-mail: elenatkachevskaya@yandex.ru

Нами обнаружено, что на основании кинетических и термодинамических параметров, характеризующих процессы экстракоординации металлопорфиринов (МП) с различными типами лигандов можно прогнозировать константы скоростей, H и S нуклеофильных и ферментативных реакций, поведение которых описывается уравнениями Гамете и Тафта. Это объясняется тем, что комплекс МП, переходное состояние в реакциях SN и фермент-субстратный комплекс с одним и тем же лигандом/нуклеофилом/субстратом имеют много общего.

В качестве параметров, характеризующих их реакционную способность, нами рекомендуется использовать константы устойчивости (К) комплексов цинк(II)тетрафенилпорфина (Zn-ТФП) и величины смещения () его максимумов полос поглощения в электронных спектрах (ЭСП) при координации с различными типами лигандов в хлороформе. К настоящему времени спектрофотометрическим методом исследованы процессы комплексообразования Zn-ТФП с пиридинами, анилинами и N-оксидами пиридинов, хинолинов, акридинов, а также аминами и спиртами. В отсутствие стерических факторов между lgK комплексов Zn-ТФП и, с одной стороны, а также величинами pKBH+ лигандов в воде и -константами Гаммета заместителей в ароматическом кольце, с другой стороны, существуют линейные корреляции. Между константами скоростей реакций нуклеофильного замещения и количественными характеристиками процесса комплексообразования ZnТФП с участием пиридинов, анилинов, N-оксидов выявлены линейные зависимости (уравнение Гаммета). Для описания поведения аминов и спиртов требуется использование расширенного уравнения Тафта/Литвиненко.

Установлено, что термодинамические параметры образования (H0, S0, G0) комплексов Zn-ТФП с пиридинами и аминами линейно коррелируют с lgK,, pKBH+, -константами Гаммета заместителей в пиридиновом кольце и активационными параметрами реакций нуклеофильного замещения. Вычислено значение изоравновесной температуры (Тизо=196 К), при которой изменение энергии Гиббса не должно зависеть от природы первичных аминов и пиридинов с заместителями в положениях 3 и 4. Процессы координации Zn-ТФП с анилинами и N-оксидами пиридинов и хинолинов, замещенными в 3-м и 4-м положениях ароматического кольца (в отличие от аминов и пиридинов) являются изоэнтальпийными.

Многие важнейшие биологические процессы (фотосинтез, дыхание, ферментативный катализ) протекают с участием металлопорфиринов благодаря их способV Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ности к экстракоординации с разнообразными по своей природе электронодонорными лигандами. Мы предположили, что и при образовании фермент-субстратных комплексов момент взаимодействия между металлопорфирином (простетической группой фермента) и лигандом (субстратом) может существенным образом сказываться как на направлении, так и на скорости ферментативного превращения на данном этапе реакции или даже процесса в целом. Действительно, между логарифмами констант скоростей различных стадий взаимодействия пероксидазы хрена (lg k) с мета- и пара-замещенными анилинами и lgK, pKBH+, и -константами выполняются линейные корреляции.

Секционные доклады 95

МЕХАНИЗМ ОБРАЗОВАНИЯ ФИЛАМЕНТОВ ИЗ ПЕПТИДА H-(RADA)4-OH

Удовиченко И.П.1, Данилкович А.В.1, Липкин В.М.1,2 Филиал Учреждения РАН Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290 Пущино, Московская обл., пр. Науки, 6 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 117997 Москва, ул. Миклухо-Маклая, 16/10

E-mail: iudovichenko@rambler.ru

Самоформирующиеся пептиды способны образовывать из мономеров сложные упорядоченные олигомерные структуры, имеющие потенциал использования в технике и медицине. Так, филаменты, образуемые пептидом H-(RADA)4-OH могут найти применение в качестве среды для пролиферации клеток в тканевой инженерии, в частности, при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с ишемией.

Процесс образования филаментов из H-(RADA)4-OH был исследован in silico моделированием молекулярной динамики в Amber11 в явном водном окружении и силовом поле ff03 пептидных мономеров, димеров, тетрамеров, октамеров и додекамеров с использованием докинга в HEX6.1 в режиме учета геометрии модели и поверхностных зарядов, а также GRAMM-X.

Анализ энергии образования комплексов G, µGBSA, EMM демонстрирует тенденцию к образованию олигомерных структур. Данные по RMSd и RMSf, а также карты Рамачандрана доказывают уверенную стабилизацию структур, начиная с тетрамера.

Показано, что ядром образования филамента можно считать тетрамер, в котором -антипараллельные структуры димеров стабилизируются гидрофобными взаимодействиями остатков Ala между димерами, а сам филамент представляет собой двухслойную структуру, где внутри каждого слоя присутствуют -антипараллельные структуры, а слои связаны между собой гидрофобными взаимодействиями.

Настоящая работа поддержана грантами № 02.740.11.5224, № 14.740.11.0170 и № 16.512.11.2066 Министерства образования и науки Российской Федерации в рамках Федеральных целевых программ «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009–2013 годы» и «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007–2012 годы».

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

–  –  –

КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ДЛЯ ПОИСКА И ИЗУЧЕНИЯ МЕХАНИЗМОВ

ДЕЙСТВИЯ НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Гривенников И.А.1, Антонов С.А.1, Арсеньева Е.Л.1, Долотов О.В.1, Иноземцева Л.С., Кобылянский А.Г., Лагарькова М.А., Лебедева О.С., Мануилова Е.С., Новосадова Е.В.

Учреждение РАН Институт молекулярной генетики РАН, 123182 Москва, пл. Ак. Курчатова, 2 Учреждение РАН Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН, Москва

E-mail: igorag@img.ras.ru

В результате проведенных исследований создана перспективная тест-система, основанная на использовании первичных культур нервных и глиальных клеток из мозга млекопитающих. Данная тест-система была использована для поиска соединений, обладающих нейропротекторной активности. Отличительной особенностью разработанной тест-системы являлась возможность оценивать синтезированные соединения не только по их влиянию на пролиферативную активность глиальных клеток и жизнеспособность нейронов различных популяций, но и по их способности стимулировать экспрессию ряда генов, кодирующих нейротрофические факторы, необходимых для роста, дифференцировки и нормального функционирования клеток нервной системы. Другой перспективной моделью, разрабатываемой в настоящее время, являются линии индуцированных плюрипотентных стволовых (ИПС) клеток, полученные как от нормальных людей, так и от пациентов страдающих различными нейродегенеративными заболеваниями. Такие клетки пригодны для использования в системах скрининга потенциальных лекарственных препаратов с нейропротекторной активностью, а также для изучения молекулярных и клеточных основ тяжелых болезней человека. В результате ряда экспериментов из фибробластов кожи больных, страдающих наследственными формами болезни Паркинсона и болезни Хантингтона, получены и охарактеризованы несколько линий ИПС клеток. Показано, что эти клетки способны к дифференцировке в клетки нейроглиального ряда под действием ряда специфических факторов. Такой подход позволяет индивидуализировать как процесс подбора соответствующих лекарственных препаратов, так и исследования молекулярных основ различных тяжелых патологий человека.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки РФ (ГК № 16.512.11.2103) и Российского фонда фундаментальных исследований (№ 11-04-01337-а).

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

МАТРИКИНЫ И ДРУГИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ПЕПТИДЫ,

ОБРАЗУЮЩИЕСЯ ИЗ БЕЛКОВ ВНЕКЛЕТОЧНОГО МАТРИКСА

Шрам С.И., Мясоедов Н.Ф.

Учреждение РАН Институт молекулярной генетики РАН, 123182 Москва, пл. Ак. Курчатова, 2 E-mail: shram@img.ras.ru Белки внеклеточного матрикса (ВКМ) непосредственно вовлечены в формирование соединительной ткани; они также осуществляют механическую поддержку и регуляцию активности клеток через взаимодействие с рецепторами клеточной адгезии. Кроме того, было обнаружено, что образующиеся из белков ВКМ под действием специфических протеаз небольшие пептиды, так называемые матрикины, участвуют в регуляции процессов пролиферации, роста, миграции и апоптоза клеток. Ряд биологически активных пептидов образуется из белков ВКМ в процессе пищеварения, и затем всасывается в кровь. Доклад посвящен обсуждению вопросов, связанных с образованием, метаболизмом и биологической активностью пептидов из ВКМ, а также с изучением фармакологических свойств их синтетических аналогов.

В докладе будут представлены результаты исследования действия коротких пептидов, состоящих преимущественно из остатков Gly, Pro и Hyp (глипролинов), на процессы нейродегенерации в экспериментах in vitro и in vivo. Показано, что пептид H-Pro-Gly-Pro-OH и целый ряд его аналогов способны увеличивать выживаемость нейрональных клеток в культуре при действии цитотоксических агентов.

При этом установлена строгая зависимость цитопротективной активности от Сконцевой последовательности в молекуле глипролинов. Защитное действие этих пептидов также продемонстрировано в экспериментах на моделях нейродегенерации in vivo. Были выяснены основные пути метаболизма глипролинов в организме и выявлены ферменты, которые могут осуществлять их деградацию. Наконец будет обсужден вопрос о перспективности разработки на основе пептидов из ВКМ и их синтетических аналогов новых лекарственных препаратов.

Работа выполнена при частичной поддержке проектов РФФИ № 08-04-01760-а и № 09-04-13813-офи_ц.

Секционные доклады 99

ФОФСОЛИПАЗЫ ИЗ ЯДА ЗМЕЙ СПОСОБНЫ БЛОКИРОВАТЬ

НИКОТИНОВЫЕ ХОЛИНОРЕЦЕПТОРЫ

Вульфиус Е.А.1, Горбачева Е.В.1, Старков В.Г.2, Осипов А.В.2, Никитин И.Г.2, Кашеверов И.Е., Андреева Т.В., Цетлин В.И., Уткин Ю.Н.

Учреждение РАН Институт биофизики клетки РАН, 142290 Пущино, Московская обл., Институтская ул., 3 Учреждение РАН Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва

E-mail: vulfius@gmail.com

Яды змей являются богатым источником высокоактивных соединений полипептидной природы, направленных на поражение жертвы. Среди них особого внимания заслуживают токсины, взаимодействующие с никотиновыми холинорецепторами (нХР) и фосфолипазы (PLA2), нарушающие процесс выделения медиатора из нервного окончания.

В ходе поиска в ядах змей семейства Viperidae полипептидов, способных блокировать нХР мы показали, что цельные яды 6 видов, некоторые фракции ядов, а также полипептиды, выделенные из ядов с помощью различных методов жидкостной хроматографии, подавляют ток, вызванный ацетилхолином (АХ) в идентифицированных нейронах прудовика Lymnaea stagnalis. В частности, из высокомолекулярной фракции яда африканской шумящей гадюки Bitis arietans нами был выделен новый индивидуальный белок битанарин, который блокировал ответ нейронов на АХ с IC50 11,4 мкМ. Битанарин ингибировал также связывание 125I--бунгаротоксина с нХР мышечного типа в мембранах электрического органа Torpedo californica, с 7 нХР человека, экспрессированными в клетках линии GH4C1, и с АХ-связывающим белком (IC50 соответственно 4,3, 20 и 10,6 мкМ). Анализ N-концевой аминокислотной последовательности битанарина и некоторых триптических фрагментов выявил его большое сходство с PLA2 других змей. Фосфолипазная активность битанарина – 1,95 ммоль/мин/мкмоль, оказалась сопоставимой с активностью PLA2 из яда других змей. PLA2 из яда Vipera renardi, Naja kaouthia и Bungarus fasciatus также уменьшали ответ нейронов на АХ (IC50 около 50 мкМ).

Полученные результаты позволяют предположить наличие в молекуле PLA2 структурных элементов, имеющих сродство к нХР.

Работа выполнена при финансовой поддержке Российского фонда фундаментальных исследований (гранты №№ 09-04-01061, 10-04-00737 и 10-04-00708), Министерства образования и науки Российской Федерации (контракт № 02.740.11.0865) и программы FP7 Европейского Сообщества (грант № 202088).

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

ПЕРИНАТАЛЬНОЕ «ПРОГРАММИРОВАНИЕ» ИММУННОЙ СИСТЕМЫ

ПЕПТИДАМИ ГИПОТАЛАМУСА

Захарова Л.А., Мельникова В.И.

Учреждение РАН Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН, 119991 Москва, ул. Вавилова, 26 E-mail: zakharova-l@mail.ru Согласно современным представлениям, функции пептидов и гормонов гипоталамо-гипофизарной системы различны на разных этапах онтогенеза. В перинатальном онтогенезе они контролируют процессы роста и дифференцировки тканей плода и осуществляют не только регуляторные, но и морфогенетические функции. В постнатальный период они участвуют, в основном, в поддержании гомеостаза иммунной системы в ответ на изменения окружающей среды. Важной сигнальной молекулой, программирующей развитие и функционирование нейроэндокринной и иммунной систем, является декапептид гонадотропин-рилизинг гормон (ГРГ), который первоначально рассматривали в качестве гормона, контролирующего репродуктивную функцию организма. В результате блокады синтеза ГРГ или его рецепторов в ранний период онтогенеза подавляется морфофункциональное развитие тимуса. Наблюдается снижение массы тимуса, количества тимоцитов и эпителиальных клеток, и как следствие, снижение лимфоцитов в селезенке и периферической крови, подавление клеточного и гуморального иммунитета.

Эти нарушения сохраняются длительное время. Наряду с гипоталамусом, синтез ГРГ обнаружен в тимусе плодов, уровень которого снижается вдвое после внутриутробного удаления гипоталамуса. Дефицит нанопептида аргинин-вазопрессина (АВП) в раннем онтогенезе также приводит к необратимым изменениям в иммунной и эндокринной системах. В качестве экспериментальной модели для изучения функциональных свойств АВП часто используют крыс Brattleboro с наследственным дефектом синтеза гипоталамического АВП. Они характеризуются выраженным несахарным диабетом с высоким уровнем потребления и выведения воды.

Отсутствие циркулирующего АВП приводит к функциональным отклонениям в иммунной системе половозрелых особей: ранней инволюции тимуса и селезенки, подавлению активности макрофагов, клеточного и гуморального иммунитета, усилению противоопухолевого иммунитета. Длительное компенсаторное введение АВП половозрелым крысам нормализует у них водно-солевой баланс, но не влияет на иммунитет и функцию надпочечников. Таким образом, изменение содержания гипоталамических пептидов ГРГ и АВП вызывает нарушения в центральных органах иммунной системы, что в последствии приводит к нарушениям во вторичных лимфоидных органах.

Секционные доклады 101

КАРДИОПРОТЕКТИВНЫЕ ЭФФЕКТЫ СИНТЕТИЧЕСКИХ АНАЛОГОВ

ЭНКЕФАЛИНОВ

Мурашев А.Н.1,2,3, Шайхутдинова Э.Р.1,2, Боброва И.А.4, Хохлова О.Н.1, 1 1,3 4 4 Слащева Г.А., Берчатова А.А., Крапф Г., Биссессар Э.

Филиал Учреждения РАН Института биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290 Пущино, Московская обл., пр. Науки, 6 Пущинский государственный университет, 142290 Пущино, Московская обл., пр. Науки, 3 Филиал МГУ им. М.В. Ломоносова, 142290 Пущино, Московская обл., мкр-н «В», 20А Eribis Pharmaceuticals AB, Uppsala, Sweden

E-mail shai78@rambler.ru

Известно, что ишемическое прекондиционирование уменьшает размеры инфаркта миокарда и сопровождается увеличением концентрации энкефалинов в плазме крови, что указывает на их возможное участие в реализации кардиопротективного действия ишемического прекондиционирования. Время полужизни природных энкефалинов в плазме крови не превышает нескольких минут, поэтому целью данного исследования было изучение кардиопротективных эффектов синтетических аналогов энкефалинов. И.В.Бобровой предложены аналоги энкефалинов, имеющие тетрапептидную структуру (Tyr–A–Gly–Phe) [Pat. 12310193 PCT/SE2007/000731], пять пептидов были синтезированы, они получили кодовые названия как ЕР91, ЕР92, ЕР93, ЕР94 и ЕР95. У крыс СD при искусственной вентиляции легких моделировали острый инфаркт миокарда окклюзией левой коронарной артерии в течение 25 минут с последующей реперфузией в течение 120 минут. Для оценки кардиопротективного эффекта пептиды вводили внутривенно за 5 минут до окклюзии. Контролем служили животные, которые получали физиологический раствор. Для определения зоны риска по окончании реперфузии вновь вызывали окклюзию и вводили метиленовую синьку для определения зоны риска. Зону инфаркта миокарда выявляли окрашиванием срезов сердца толщиной 2 мм 2,3,5-трифенилтетразолием хлоридом. Измеряли площадь зоны инфаркта, площадь зоны риска с помощью программы Image TOOL и рассчитывали отношение, выраженное в процентах, зоны инфаркта к зоне риска. У контрольных животных отношение зоны инфаркта к зоне риска составило 42,9±2,7%. Из пяти изученных пептидов, только ЕР91 и ЕР94 уменьшали отношение зоны инфаркта к зоне риска до 27,5±2,4% и 26,0±3,5% по сравнению с контрольными животными с наибольшим эффектом в дозах 5 и 1 мкг/кг, соответственно. Таким образом, синтетические аналоги энкефалинов можно рассматривать как перспективные молекулы для создания новых кардиопротективных препаратов.

V Российский симпозиум «Белки и пептиды»

К ПРОБЛЕМЕ ПОЛИФУНКЦИОНАЛЬНОСТИ РЕГУЛЯТОРНЫХ

ПЕПТИДОВ

Толпыго С.М., Певцова Е.И., Котов А.В.



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 9 |
Похожие работы:

«1 Зелная палочка. №2 Февраль 2013 МБОУ—гимназия №3 г. Тулы МБОУ— 2013 год объявлен Президентом Российской Федерации Годом охраны окружающей среды. Однако вопросами охраны окружающей среды нужно заниматься не...»

«Небанковская кредитная организация акционерное общество "НАЦИОНАЛЬНЫЙ РАСЧЕТНЫЙ ДЕПОЗИТАРИЙ" Руководство пользователя WEB-кабинет Системы управления обеспечением WEB-кабинет Системы управления обеспечением Список изменений № верДата подготовКраткое описание сии ки версии 1 Начальная верси...»

«Ученые записки университета имени П.Ф. Лесгафта, № 9 (91) – 2012 год учебное пособие / Д.Н. Давиденко, А.И. Зорин, В.Е. Борилкевич ; отв. ред. Д.Н. Давиденко ; С.-Петерб. гос. ун-т. – СПб. : Изд-во СПб ГУ, 2001. – 208 с.3. Данилин...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "САРАТОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИ...»

«МБОУ "Анабарская улусная гимназия"ОБСУЖДЕНО СОГЛАСОВАНО УТВЕРЖДАЮ На заседание МО зам директора по УНР директор школы Естественно-математического цикла Герасимова Н.И. Матвеева В.А._ Торокова А.П._ "_"_2015 г "_"_2015г. "_" 2015 г. Р...»

«Приказ Минздрава России от 15.11.2012 N 927н Об утверждении Порядка оказания медицинской помощи пострадавшим с сочетанными, множественными и изолированными травмами, сопровождающимися шоком (Зарегистрировано в Минюсте Рос...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "САРАТОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ Н.Г. ЧЕРНЫШЕВСКОГО" Кафедра геоморфологии и геоэко...»

«А. С. АХИЕЗЕР Жизнеспособность российского общества Вынесенное в заголовок статьи понятие "жизнеспособность" является, быть может, центральной характеристикой любого общества. В России последних лет тема жизнеспособности, равно как и выживаемость, привлекает многих ученых. Однако сами эти понятия в русском языке...»

«НИКУЛИН АРТУР ЮРЬЕВИЧ ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВЯЗИ И ФИЛОГЕОГРАФИЯ OROSTACHYS SPINOSA (L.) SWEET (CRASSULACEAE J.ST.-HIL.) ПО ДАННЫМ АНАЛИЗА НУКЛЕОТИДНЫХ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОCТЕЙ МЕЖГЕННЫХ СПЕЙСЕРОВ ЯДЕРНОЙ И ХЛОРОП...»

«4 истории в картинках Я сделал свою первую мультимедийную презентацию в 17 лет. Она предназначалась для большого проекта на школьном уроке биологии и была посвящена загрязнению окружающей среды. Мое слайд-шоу должно было показать всему классу красоту окружающего мира, противопоста...»

«ГБОУ ВПО ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ имени И. М. Сеченова МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ПЕДИАТРИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ кафедра гигиены детей и подростков ПРАКТИЧЕСКИЕ З...»

«Экологическое занятие Подготовила и провела воспитатель высшей категории Васильева С.А "Лесное царство" Цель: закрепить знания о лесе, как о экосистеме.Задачи: — дать детям представление о том, что лес – это живой организм, который мы должны беречь, учить анализировать и делать выводы о нек...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Нижневартовский государственный университет" Естественно-географический факультет Рабочая п...»

«Topical issues of law: theory and practice. №26. 2013 вопорядка как объективную необходимость развития государства и общества. Охарактеризованы особенности правоохранительной д...»

«Секция 11. Экология, безопасность и охрана труда на предприятии Но уже сейчас очевидно, что успешность прогнозов, получаемых на основе имитационных моделей, существенно будет зависеть от качества стат. анализа эмпирического материала, от того, насколько такой анализ сможет выявить и обобщить за...»

«Ученые записки Таврического национального университета имени В. И. Вернадского Серия "География". Том 27 (66), № 2. 2014 г. С. 3–15. РАЗДЕЛ 1. ФИЗИЧЕСКАЯ ГЕОГРАФИЯ И ГЕОЭКОЛОГИЯ УДК 620.91:712.253.58 "ЗЕЛЁНАЯ" ЭНЕРГЕТИКА В САДОВО-ПАРКОВЫХ КОМПЛЕКСАХ Багрова Л.А., Змерзлая К.С., Мазинов А.С.-А. Таври...»

«Экосистемы. 2016. Вып. 6. С. 100–106 СЕЛЕКЦИЯ И ДЕКОРАТИВНОЕ РАСТЕНИЕВОДСТВО УДК: 582.973:631.526.32 ХОЗЯЙСТВЕННО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕКОРАТИВНЫХ СОРТОВ И ФОРМ ЖИМОЛОСТИ (LONICERA L.) В РОССИИ Сорокопудов В. Н.1, Куклина А. Г.2...»

«УДК 53.023/072.001.24:542.632–195:541.182.644 ЭФФЕКТ ПЕРИОДИЧЕСКОЙ ДИФФУЗИОННОЙ ПРОВОДИМОСТИ В ГЕЛЕ КРЕМНИЕВОЙ КИСЛОТЫ Ю.И. Сухарев (1), Ю.В. Матвейчук (2), С.В. Курчейко (3). e-mail: sucharev@water.tu-chel.ac.ru (1), diff@irex.urc.ac.ru (2,3) Южно-Уральский государственный университет, г. Челябинск ВВЕДЕНИЕ В настоящее вр...»

«О.А. Белых и др.: Дикоросы как источник биотехнологического сырья для производства УДК 630.2.56.9: 643.0.524 ДИКОРОСЫ КАК ИСТОЧНИК БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОГО СЫРЬЯ ДЛЯ ПРОИЗВОДСТВА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ И БАДОВ О.А. Белых1, А.Н.Петров2, А.Г.Еникеев3 ГОУ ВПО "Иркутский государственный педагогический университет" 664004 И...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "ТЮМЕНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" Институт биол...»








 
2017 www.kn.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные ресурсы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.