WWW.KN.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные ресурсы
 

Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |

«The X International Conference “Plant Cell Biology In Vitro and Biotechnology” ABSTRACTS Kazan, October 14-18, 2013 УДК [581.17+663.1](063) The X International ...»

-- [ Страница 3 ] --

bretill@mail.ru2 V. N. Sukachev Institute of Forest, 660036 Krasnoyarsk, Academgorodok 50, 28; tel. (391)249-46-25; fax: (391) 243-36-86; e-mail: culture@ksc.krasn.ru Induction of embryogenic callus and somatic embryos was attempted using Siberian pine (Pinus sibirica) megagametophyte and zygotic embryos cultures. Megagametophytes and zygotic embryos at the cleavage and globular embryo stages, 3-4 weeks after egg cell fertilization, served as explants. Culturing was done on 1/2LV medium added by 2.4-D (9µМ) and 6-BAP (4.5 µМ) growth regulators, 30 g/l sucrose, 1 g/l glutamine, 0.5 g/l casein, 0.1 g/l mesoinositol, and 0.3 g/l ascorbic acid.

After 7-10 days of megagametophytes culturing, callus began to form along the megagametophyte axes in corrosion cavities. A cytological analysis of megagametophyte culture revealed that cells elongation set on along the longitudinal megagametophyte axes on the culturing days 7-10. By the end of the first month of culturing the calluses formed were completely composed of elongated vacuolated cells each containing 2-4 conspicuous nuclei. The 4 nuclei migrated toward either cell pole, where later embryoid initial cell formation occurred.

The initials divided to form aggregates, which then made up somatic embryoid globules. The cells of the lower globule parts grew longer and formed suspensors, each composed of a bunch of 6-7 long, vacuolated cells. After the embryogenic calluses had been cultured on a proliferation medium with lower contents of 6-BAP (2.2 µМ) and sucrose (20 g/l) 2-month, cenocyts with 2-4 nuclei in the appeared in suspensor edge cells. The nuclei in cenocytes migrated to the distal suspensor end, where formation of initials and somatic embryos then took place.

After 4-8 days zygotic embryos culturing, callus formed in the area of embryonic root.

In the zygotic embryos culture elongated embryonal tubes formed. Embryonic tube asymmetrically divided into proliferation medium. Embryonic globules and suspensors formed.

Formation of somatic embryos occurred.

Thus it was shown that formation of somatic embryoids in megagametophyte culture and zygotic embryo culture is different. In the zygotic embryos culture, cells elongated and asymmetrically divided, like in vivo. In the megagametophyte culture, coenocytes formed, nuclei migrated toward either cell pole, where formation of initial cells and somatic embryoids globules occurred.

–  –  –

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КУЛЬТУРЫ ПЫЛЬНИКОВ ДЛЯ ЗАКРЕПЛЕНИЯ

ГЕТЕРОЗИСНОГО ЭФФЕКТА У ГИБРИДОВ РИСА

Гончарова Ю.К., Харитонов Е.М., Бушман Н.Ю.

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт риса Российской академии сельскохозяйственных наук,, 350921, Россия, Краснодар, п.

Белозерный, ГНУВНИИ риса, факс: (8612) 29-49-91, тел. 918 6295299, e-mail:

serggontchar@mail.ru Повысить урожайность риса на данном этапе методами традиционной селекции не представляется возможным, так как во всем мире отмечено снижение эффективности селекционной работы. Потенциал продуктивности новых сортов, несмотря на увеличение устойчивости к стрессам и повышение качества, остается на уровне сортов созданных еще в 1960-е годы. Только использование гетерозисного эффекта дает возможность радикально, более чем на 50 %, поднять продуктивность.

Однако в мире до сих пор не предложено реализованных подходов к закреплению гетерозиса гибридов в последующих поколениях, или другими словами фиксации комплекса генов определяющих гетерозисный эффект. Методы решения данной проблемы, предложеные академиком Струнниковым В.А. испытаны и модифицированы во ВНИИ риса.





Гетерозис возникает при гибридизации особей, в генотипах которых сформировались комплексы генов повышающих жизнеспособность. Такие комплексы генов формируются у родительских форм в противовес наличию леталей и полулеталей в генотипе. Следовательно, гетерозисный гибрид должен нести гены снижающие жизнеспособность. Удалить эти гены из генотипа гибрида можно за счет рекомбинации. Сам процесс мы контролировать не можем, но в условиях стресса (в нашем случае культуры пыльников) выживает только та часть потомства гибрида, которая унаследовала от него большую часть благоприятных генов. Так как гомозиготные организмы, в генотипе которых содержится много леталей, полулеталей и субвиталей в подавляющем большинстве погибают на ранних стадиях развития. Выживают только те особи, которым в результате мейоза не досталось, или досталось очень мало вредных генов. В случае выживания таких особей их легко удалить из популяции за счет их низкой жизнеспособности или продуктивности. При этом комплекс генов определяющих гетерозис распределяется по популяции дигаплоидных линий. Для создания сорта с продуктивностью аналогичной гетерозисному гибриду задачей селекционера становится объединение лучших аллелей в одном генотипе с использованием молекулярного маркирования. Ранее мы показали селективную элиминацию аллелей в культуре пыльников на организменном уровне, и на популяции дигаплоидных линий на молекулярном уровне, что подтверждает возможность использования культуры пыльников для удаления генов снижающих жизнеспособность и продуктивность из генотипа гетерозисного гибрида. По разработанным нами методикам возможно получение сортов с урожайностью исходного гибрида в течение 3-4 лет, что позволит увеличить потенциал продуктивности культуры на 20-50% и в короткие сроки создать сорта риса с урожайностью 12-15 т/га.

Для успешного массового применения методики закрепления гетерозиса необходимо дальнейшее совершенствование методов получения дигаплоидов, значительное сокращение периода от высадки пыльников на среду до получения регенерантов, а также получение большего процента регенерации зеленых почек и растений в каждой гибридной комбинации.

–  –  –

The state scientific institution the All-Russian scientific rice research institute of the Russian academy of agricultural sciences, 350921, Russia, Krasnodar, Belozernyi, ARRI.

Fax: (861) 229-49-91, ph. 918 6295299, e-mail: serggontchar@mail.ru Yield potential of newly-released varieties by conventional breeding method in various regions of the world remains at the same level many years. To raise productivity of rice at the given stage by methods of traditional selection it is not obviously possible, as decrease in efficiency of selection work all over the world is noted. The new varieties productivity potential, despite of increasing of stability to stresses and improvement of quality, remains at level of varieties created in 1960th years. Only use of heterosis effect gives the chance considerably, more than on 50 % to lift productivity if crop.

However in the world till now it is not offered the realised approaches to fastening heterosis hybrids in the subsequent generations, or in other words to fixing complex of genes defining heterosis effect. Methods of decision given problem, are offered by the academician Strunnikov V. A, and was studied and modified in ARRI.

Heterotic effect appears as a result of inheritance from parents coordinated compensation complex of favourable genes, appeared as a result of screening on the base of harmful genetic and ecological factors effect. Hence heterosis hybrid should bear genes reducing viability. Problem of heterosis maintenance can be solved by means of getting hybrids without lethals and half-lethals. For cleaning hybrid genotype from decreasing viability and productivity genes, we used anther culture. For removing of these genes from a hybrid genotype it is possible to use recombination. We cannot supervise of this process, but in the conditions of stress (in our case - anther culture), survives only that part of posterity of a hybrid which has inherited from it the most part of favorable genes.. If parental lines of hybrid carry unfavorable genes, they could only survive (and also has a good productivity) in the case that they have also a complex of favorable genes that are strong enough to compensate the effects of unfavorable gene. In hybrid, unfavorable gene must be in the recessive and we can control them through decreasing the productivity. In case of a survival individuals with unfavorable gene, it is easy to remove this plant from population because of their low viability or productivity. A complex of favorable genes from one or both parental lines provides manifestation of heterosis effect. When we receive double haploid line the complex of genes defining heterosis effect distributed on population double haploid lines.

Main task of breeder in this step - to combine best allels of initial hybrid in one genotype by using of molecular marking. Earlier efficiency of using anther culture for cleaning of hybrid genotype from unfavorable gene was shown by us on molecular and organism level.

By the methods developed, it could be possible to develop varieties with the yield similar to the original hybrid within 3–4 years and increase the productivity potential of a crop by 20–50% and in short terms to create rice varieties with productivity 12-15 t/hectares.

For successful mass application of a technique of fastening heterosis in the further generation it is necessary to develop method of considerable decrease time of reception of double haploid line, and also obtaining more high percent of regeneration of green plants in each hybrid combination.

–  –  –

All-Russia Research Institute of Legumes and Groat Crops, p/b Streletskoye, 302502, Orel, fax:

(4862)403130, phone. (4862)403224, e-mail: galina@vniizbk.ru Известные исследования показывают возможность регенерации побегов нута Cicer arietinum L.из зародышевых осей проростков. Авторы используют различные регуляторы роста и схемы культивирования, однако информации о возможности длительного культивирования in vitro изолированных тканей нута недостаточно. Цель настоящих исследований заключалась в изучении влияния минерального состава и регуляторов роста на процессы регенерации побегов в изолированных эксплантах нута in vitro.

Материалом для исследований служили образцы нута коллекции ВИР к- 1029 (семена черные, морщинистые, тип Desi), к-1507 (семена темно-коричневые, морщинистые, тип Desi), к-1737 Красноградский 5 (семена желтые окраски, гладкие, тип Kabuli). Первичными эксплантами являлись фрагменты эпикотилей недельных стерильных проростков. Изучали 14 вариантов индукционных сред с минеральной основой МS или В5 и различающихся составом регуляторов роста с различными вариантами органических добавок. В качестве регуляторов роста использовали 6бензиламинопурин (БАП), 2iP, индолил-3-уксусную кислоту (ИУК), -нафтилуксусную кислоту (НУК), индолил-3-масляную кислоту (ИМК). Содержание 6-бензиламинопурина (БАП) в средах составляло 5…20 µМ, 2iP – 10 µМ, индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) или -нафтилуксусной кислоты (НУК) - 0,1…1 µМ, индолил-3-масляной кислоты - 0,5 µМ. Семена нута перед проращиванием стерилизовали в течение нескольких секунд в 70% этаноле и в течение 5 минут в 0,5% или 0,25% растворе хлоргексидинглюконата натрия.

На первом этапе эксперимента результаты дисперсионного анализа выявили существенное влияние фактора генотипа как на формирование побегов in vitro, так и на прирост тканевой массы. Лучшие результаты получены у образца к-1507, у которого в среднем по всем вариантам опыта формировалось 4,0 побега на эксплант и прирост ткани составил 16,9 мг/сутки, у образца к-1029 среднее число побегов составило 2,6 на эксплант, и средний прирост тканевой массы 7,5 г/сутки. В целом наиболее эффективным для роста было использование 6-бензиаминопурина в сочетании с -нафтилуксусной кислотой, чем с индолилуксусной кислотой.

На втором этапе выявлено существенное преимущество минеральной основы В5 в сравнении с MS в отношении формирования побегов in vitro. Влияние типа цитокинина на развитие побегов было несущественным. На средах В5 формировалось в среднем 4,4 побега на пробирку, на средах MS развивалось 3,3 побега на пробирку.

На третьем этапе изучалось действие органических добавок в виде глутамина (1500 мг/л) и гидролизата казеина (1000 мг/л). Дисперсионный анализ не выявил существенных различий между вариантами сред. Таким образом, нами установлено что рост и развитие изолированных сегментов проростков нута в культуре in vitro зависят от генотипа, минерального состава питательных сред и регуляторов роста в среде.

Вопросы укоренения регенрантных побегов нута и длительного культивирования требуют дальнейшего изучения.

Исследования поддержаны грантом РФФИ и Управления промышленности Орловской области № 12-04-97552.

Секция 2

–  –  –

All-Russia Research Institute of Legumes and Groat Crops, p/b Streletskoye, 302502, Orel, fax:

(4862)403130, phone. (4862)403224, e-mail: galina@vniizbk.ru Shoot regeneration from embryo axis of chickpea Cicer arietinum L. was demonstrated by a number of investigations. Researchers use various growth regulators and culture methods, but information regarding long term in vitro cultivation of chickpea is insufficient. The aim of the present research was to study on effect of growth regulators and mineral composition on shoot regeneration in a culture of isolated explants of chickpea.

The initial materials used there were three accessions of chickpea received from the Vavilov Research Institute: k-1029 (black colored wrinkled seeds, Desi type), k-1507 (brown colored wrinkled seeds, Desi type), к-1737 vr. Krasnogradcki 5, (yellow smooth seeds, Kabuli type). Primary explants were cuts of epicotyls of one week old seedlings. Fourteen variants of nutrient media with mineral salts of MS or B5 and various combinations of growth regulators were studied. As growth regulators there were used 6-benzylaminopurine, 2iP, indole-3-acetic acid, indole-3-butyric acid, -naphthylacetic acid. Content of 6-benzylaminopurine varied at the level of 5…20 µМ, 2iP – 10 µМ, indole-3-acetic acid or -naphthylacetic acid - 0,1 - 1 µМ, indole-3-butyric acid – 0,5 µМ. Seeds were sterilized by 70% ethanol for a few seconds, and by 0,25…0,5% sodium chlorhexidine gluconate for 5 minutes.

On the first phase of the experiment analysis of variance revealed a significant effect of genotype on shoot formation in vitro, as well as on the rate of tissue growth. Accession к-1507 demonstrated the best results, where 4 shoots per explant were formed in average and tissue growth rate was 16,9 g/day. While accession k-1029 formed 2,6 shoots per explant with tissue growth rate 7,5 g/day. Use of 6-benzylaminopurine in combination with -naphthylacetic acid was more effective comparatively with indole-3-acetic acid.

On the second stage it was revealed that the most preferred media were those with mineral salts of B5 comparatively with MS. Influence of cytokinin type was insignificant. There were formed 4,4 shoots per explants in average on B5 media and 3,3 shoots on MS media.

On the third phase effect of organic substances as glutamine (1500 mg/l) and casein hydrolyzate was studied. Analysis of variance revealed no significant differences between media variants. So it was found that growth and development of chickpea seedling cuts in vitro depend on chickpea genotype, medium mineral base and growth regulators. Rooting procedure and long term cultivation of isolated chickpea tissue required further research.

The reported study was funded by RFBR and Industry department of Orel region, research project No. 12-04-97552.

–  –  –

Государственное учреждение Институт сельского хозяйства степной зоны Национальной академии аграрных наук Украины, г. Днепропетровск, 49600, ул. Дзержинского, 14, факс: (+380562) 36-26-18, тел. (+38056) 745-02-36, e-mail: satarova2008@yandex.ru Получение растений-регенерантов в культуре каллусной ткани – важный заключительный этап в работах по клеточной селекции, получению сомаклональных вариантов и генетической трансформации. Регенерация растений из каллусной ткани может осуществляться в результате таких типов морфогенеза как органогенез (гемморизогенез, геммогенез) или соматический эмбриогенез (эмбриоидогенез).

У кукурузы регенеранты, сформировавшиеся путем органогенеза, представляют собой побег или розетку листовых структур, которые чаще всего не имеют корня, т.е. развиваются путем геммогенеза. Растения-регенеранты, возникшие путем эмбриоидогенеза, обычно имеют один побег и один корень. Побег и корень таких растений объединены общей проводящей системой и, поэтому, лучше приживаются при пересадке в почву. Растения-регенеранты, полученные из эмбриоидов, не нуждаются в укоренении, что сокращает длительность и трудоемкость биотехнологического процесса получения растений in vitro. Фитогормоны лишь в незначительной степени затрагивают тип морфогенеза у кукурузы, основным фактором, определяющим успех регенерации, является генотип эксплантата. В связи с этим генотипическая оценка способности кукурузы к тому или иному типу морфогенеза in vitro является актуальной.

Нами оценивалась способность к различным типам морфогенеза каллусной ткани, полученной из незрелых зародышей длиной 1-1,5 мм, у линий и гибридов кукурузы.

Исследовались линии ДК267, ДК6080, ДК420-1, ДК298 и ДК3070 зародышевой плазмы Ланкастер, как одной из наиболее коммерчески и селекционно-ценной для Украины, а также модельные линии A188, PLS61 и Chi31. Исследуемые гибриды были представлены прямыми и обратными гибридами линий кукурузы плазмы Ланкастер и модельных линий. Каллусогенез индуцировали на модифицированной среде N6, а регенерацию – на модифицированной среде MS.

Растения-регенеранты у всех изученных генотипов образовывались как путем геммогенеза, так и путем эмбриоидогенеза. Однако было установлено, что у модельных линий геммогенез значительно преобладал над эмбриоидогенезом (на 55,22%), в то время как у линий плазмы Ланкастер оба типа встречались примерно с одинаковой частотой (57,69% и 42,31%, соответственно). У гибридов, созданных при участии модельной линии PLS61, геммогенез преобладал над эмбриоидогенезом на 73,26%. Вместе с тем, у гибридов с линиями А188 и Chi31 тип морфогенеза зависел от длительности культивирования на каллусогенной среде.

При трансплантации 30-суточной каллусной ткани этих гибридов на среды для регенерации чаще наблюдался геммогенез (93,67% для гибридов с линией А188 и 80,00% для гибридов с линией Chi31). При высадке 60-суточной культуры гибридов с линией А188 преобладал эмбриоидогенез (70,59%), а у гибридов с линией Chi31 уровни геммогенеза и эмбриоидогенеза достоверно не различались (57,89 и 42,11%). Увеличение длительности культивирования на каллусогенной среде приводило к формированию дополнительного количества эмбриоидов.

Таким образом, тип морфогенеза в культуре in vitro у кукурузы зависит главным образом от генотипа эксплантата, а также от длительности культивирования каллусной ткани.

В биотехнологических исследованиях для увеличения выхода растений-регенерантов рекомендуется использовать линии плазмы Ланкастер и гибриды этих линий с модельными Секция 2

–  –  –

Agricultural Steppe Zone Institute of the National Academy of Agrarian Sciences of Ukraine, Dnepropetrovsk, 49600, Dzerzhynskyi str.,14, fax: (+380562) 36-26-18, tel. (+38056) 745-02-36, e-mail: satarova2008@yandex.ru The production of regenerated plants in callus tissue culture is an important final step in cell selection, generation somaclonal variants and genetic transformation.

Plant regeneration from callus tissue can be realized as a result of such types of morphogenesis as organogenesis (gemmorizhogenesis, gemmogenesis) or somatic embryogenesis (embryoidogenesis). Maize regenerants having been evolved by organogenesis are represented by a shoot or a rosette of leaf structures, which often have no roots, i.e. developed by gemmogenesis.

Regenerated plants having been evolved by embryoidogenesis usually have one shoot and one root.

Shoots and roots of regenerated plants have common vascular system and, therefore, they get better acclimatization after transplanting into the soil. Regenerants derived from embryoids do not need rooting, that reduces the duration and laboriousness of the biotechnological process of plant obtaining in vitro. Plant hormones slightly affect the type of maize morphogenesis, the main factor which determines regeneration success is the genotype of an explantat. Therefore, genotypic evaluation of the ability of maize to one or to the other type of the morphogenesis in vitro is relevant.

We have estimated the ability to various types of morphogenesis of calli of maize lines and hybrids derived from immature embryos 1-1.5 mm in length. We studied lines ДK267, ДK6080, ДK420-1, ДK298 and ДK3070 of Lancaster germplasm, as one of the most commercially and selectionally valuable for Ukraine, as well as model lines A188, PLS61 and Chi31. The investigated hybrids were presented by direct and diverse ones composed with Lancaster and model lines. Callus formation was induced on the modified medium N6, and regeneration was induced on the modified medium MS.

Regenerated plants of all studied genotypes have been formed both through gemmogenesis and embryoidogenesis. However, it was found that embryoidogenesis significantly prevailed over gemmogenesis for the model lines (about 55,22%), while both types have the same frequencies for Lancaster lines (57,69% and 42,31% respectively). Gemmogenesis prevailed over the embryoidogenesis for hybrids, created with the participation of model line PLS61, on about 73,26%.

However, for hybrids with A188 and Chi31 the type of morphogenesis depends on the duration of cultivation on the callus induction medium. Gemmogenesis was observed more frequently if the callus tissue of these hybrids at the age of 30 days had been transplanted on the regeneration medium (93,67% for hybrids with A188 and 80,00% for hybrids with Chi31). When 60-days culture of hybrids with A188 had been transplanted on the same medium the embryoidogenesis prevailed (70,59%), and levels of the gemmogenesis and the embryoidogenesis did not significantly differ among the hybrids with Chi31 (57,89% and 42,11%). Increasing the duration of cultivation on the callus induction medium has led to the formation of additional embryos.

In conclusion, the type of morphogenesis in maize in vitro culture depends mainly from the genotype of the explantat, as well as from the duration of callus tissue cultivation. For the increasing of the yield of regenerated plants it is strongly recommended to use the lines of Lancaster germplasm and hybrids of these lines with model lines A188 and Chi31, as well as to prolong the term of the cultivation of callus tissue before its transfer to the regeneration medium.

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центральный сибирский ботанический сад Сибирского отделения Российской академии наук, Новосибирск, 630090, Золотодолинская, 101, факс (383) 339-97-01, тел.

(383) 339-98-29, e-mail:

ulianna_zaitseva@mail.ru Культура изолированных листовых эксплантов является не только перспективной системой для массового размножения ценных генотипов растений, но и служит моделью для изучения фундаментальных основ морфогенеза in vitro, поскольку отсутствие у листа апикальных меристем дает возможность индуцировать в культуре ткани весь спектр морфогенных ответов. Существует множество работ посвященных клональному микроразмножению европейских видов и сортов рода Rhododendron, в то время как азиатские виды остаются малоизученными. Сведения о путях морфогенеза Rhododendron sichotense Pojark. в культуре листовых эксплантов практически отсутствуют. В связи с этим целью нашего исследования явилось выявление морфогенного потенциала листовых эксплантов и оптимизация технологии микроразмножения Rhododendron sichotense Pojark.

Материалом для исследования послужили молодые листья микроклонов Rhododendron sichotense. В качестве индукционной среды использовали питательные среды по прописи Андерсена (АМ) дополненные 0,1 – 10 мкМ тидиазурона (ТДЗ).

Время культивирования составило 15 недель. Экспланты фиксировали на протяжении всего эксперимента для дальнейшего морфо-гистологического анализа. Постоянные микропрепараты для световой микроскопии готовили и окрашивали по методике Паушевой (1988). После обработки ТДЗ конгломераты перенесли на безгормональную среду (АМ0). Регенеранты укореняли на АМ0 после предварительной обработки 30мг/л индолил-3-масляной кислотой (ИМК).

Установлено, что использование ТДЗ (0,1 – 5 мкМ) индуцировало прямое образование адвентивных побегов из листовых эксплантов Rhododendron sichotense. Уже после 8 недель культивирования на черешках листовых эксплантов формировались конгломераты адвентивных почек. Максимальный процент регенерации (87 и 96,6%) получен на средах с низким содержанием ТДЗ (0,5 и 1 мкМ, соответственно). Повышение концентрации ТДЗ до 5 мкМ в индукционной среде вызвало снижение регенерации.

Длительное культивирование на средах, содержащих ТДЗ, приводило к анатомическим и морфологическим нарушениям в строении побегов. Для преодоления этих аномалий конгломераты побегов переносили на среду АМ0. Через 8 недель элонгации коэффициент размножения в среднем составил 25 побегов на эксплант. Гистологический анализ постоянных микропрепаратов показал, что начальные этапы морфогенеза под действием ТДЗ происходят в эпидерме черешка или основания листа.

–  –  –

Central Siberian Botanical Garden of the Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, 630090, Zolotodolinskaya st., 101, Tel. (383) 339-98-29, Fax: (383) 330-19-86, e-mail: ulianna_zaitseva@mail.ru Culture of the isolated leaf explants is not only a promising system for the mass propagation of valuable plant genotypes, but it also serves a model for studying fundamental bases of morphogenesis in vitro, since the lack of leaf apical meristems makes possible induce a range of morphogenic responses in tissue culture. There are a lot of works on clonal micropropagation of European species and varieties of Rhododendron genus, whereas the Asian species are insufficiently studied. The data on morphogenesis pathways of Rhododendron sichotense Pojark in the leaf explants culture are practically absent. In this connection the aim of the study was to identify the morphogenic potential of leaf explants and optimize the micropropagation technology of Rhododendron sichotense Pojark.

Young leaves of Rhododendron sichotense cultured in vitro were a source of leaf explants. Anderson's medium (AM) supplemented with 0.1 – 10 µM thidiazuron (TDZ) was used as the induction medium. The culture was maintained on AM for 15 weeks. Explants were fixed throughout the experiment for the further morphological and histological analysis. The permanent preparations for light microscopy were made by Pausheva method (1988). After TDZ treatment, clumps were transferred to hormone-free medium (AM0) for shoot elongation. The microshoots were rooted on AM0 after pretreatment by 30 mg/l indole-3-butyric acid (IBA).

Using TDZ (0,1 – 5 µM) was found to induce direct adventitious shoot production from leaf explants of Rhododendron sichotense. The adventitious buds clumps formed on the petioles of leaf explants after culturing for 8 weeks. The maximum regeneration level (87 and 96.6%) was obtained when used medium with low concentration of TDZ (0.5 and 1 mM, respectively).

TDZ concentration increasing to 5 µM in the induction medium resulted in decreasing regeneration. Prolonged cultivation on the media containing TDZ led to anatomical and morphological anomalies of the shoots structure. To overcome these anomalies, shoot clumps were transferred on AM0 medium. Histological analysis of the permanent preparations showed that the initial stages of morphogenesis under the TDZ occurred in the petiole epidermis or leaf base.

–  –  –

ПОЛИСАХАРИДЫ, ВЫДЕЛЯЕМЫЕ ЭМБРИОГЕННЫМ КАЛЛУСОМ

ГРЕЧИХИ ТАТАРСКОЙ ПРИ РАЗРЫХЛЕНИИ ПРОЭМБРИОНАЛЬНЫХ

КЛЕТОЧНЫХ КОМПЛЕКСОВ

Ибрагимова Н.Н., Акулов А.Н., Горшкова Т.А., Румянцева Н.И.

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Казанский институт биохимии и биофизики Казанского научного центра РАН, Казань, 420111, ул.

Лобачевского, 2/31, факс: (843) 292 -73-47, тел. (843) 231-90-42, e-mail: nibra@yandex.ru С использованием хроматографических и иммунохимических методов были охарактеризованы полисахаридные фракции, выделяемые при разрыхлении проэмбриональных клеточных комплексов эмбриогенным каллусом гречихи татарской Fagopyrum tataricum (L.). Выявлены две отличающиеся по молекулярной массе фракции пектиновых полисахаридов, в которых присутствуют остов RGI, галактаны и полигалактуронан. Присутствие пектиновых полисахаридов в среде культивирования, вероятно, обусловлено растяжением клеточных стенок и солюбилизацией срединных пластинок – процессами, которые вовлечены в образование популяции мягкого каллуса, состоящего из сильно вакуолизированных, слабо контактирующих друг с другом клеток.

Обсуждаются возможные функции секретируемых полисахаридов и их фрагментов в процессах циклической реинициации проэмбриональных клеточных комплексов эмбриогенных каллусов.

–  –  –

Kazan Institute of Biochemistry and Biophysics, Kazan Scientific Center, Russian Academy of Sciences, Kazan, 420111, Lobachevsky str., 2/31, fax: (843) 292-73-47, tel. (843) 231-90-42, e-mail: nibra@yandex.ru To characterize polysaccharide fractions secreted by embryogenic callus of tatar buckwheat (Fagopyrum tataricum (L.) during proembryonal cell complex (PECC) loosening different chromatographic techniques combined with immunochemical methods were used. Two distinct molecular weight fractions of pectin polysaccharides, containing the RGI backbone, galactans and polygalacturonan were revealed.

The accumulation of pectic polysaccharides in culture media was most probably due to the stretching of the cell walls and middle lamellae solubilization that are involved in the formation of soft callus having highly vacuolated, loosely attached cells. The possible functions of the secreted polysaccharides and their fragments in cyclic reinitiation of PECCs in embryogenic calli are discussed.

–  –  –

Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт леса им. В.Н.

Сукачева СО РАН, Красноярск, 660036, Академгородок, 50, стр.28, тел.: (391) 249-44-47, факс: (391) 243-36-86, e-mail: dolka1981@mail.ru Соматический эмбриогенез является мощным инструментом в селекционных программах, поскольку он позволяет генерировать большое количество клоновых линий из семян ценных генотипов. У видов лиственницы соматический эмбриогенез и регенеранты получены и активно изучаются у лиственницы европейской (Larix decidua) и её гибридов.

Лиственница сибирская занимает обширный ареал на территории Сибири, однако для нее свойственна нерегулярность урожаев или полное их отсутствие. Кроме того деревья лиственницы Сибирской сильно поражаются лиственничной почковой галлицей. Поэтому актуальным является разработка современных и инновационных биотехнологий позволяющих получать быстрорастущие, высокопродуктивные, устойчивые к патогенам деревья данного вида.

Объектом исследования служили 35-40-летние деревья Larix sibirica произрастающие на территории дендрария Института леса (г. Красноярск), а также на территории ОЭП «Черное озеро» (Республика Хакасия). Материалом служили зиготические зародыши, на стадии развития семядолей. Для культивирования с целью индукции соматического эмбриоегнеза использовали базовую среду АИ (Патент № 2010114891).

В результате экспериментальной работы было обнаружено, что образование очагов эмбрионально-суспензорной массы (ЭСМ) в каллусе происходило на 25-35 сутки. Высокая пролиферационная активность ЭСМ была получена у восьми клеточных линий (КЛ). Семь из них были получены от материнского дерева 1С: КЛ 1 (2008), КЛ 2, 3, 4 (2009), КЛ 6, 7 (2011), КЛ 10 (2012), и одна КЛ 5 (гибридная) получена в результате контролируемого опыления генотипа 1С (лиственница сибирская) генотипом лиственницы Сукачева (2009 год).

Анализ КЛ № 2, 4, 5, 6, 7, показал, что они сохраняли способность пролиферировать в течение 2–4 лет. КЛ отличались по содержанию незрелых соматических зародышей в ЭСМ.

Длительное культивирование клеточных линий (19-32 месяца) приводило к снижению или к потере их эмбриогенного потенциала (у КЛ1 и КЛ3). Число соматических зародышей в расчете на 100 мг ЭСМ составляло от 210 до 390 шт у КЛ2 и КЛ1 соответственно. Пролиферирующие эмбриогенные клеточные линии отличались размерами эмбриональных структур (глобулы и суспензора соматического зародыша). Диаметр глобулы у активно пролиферирующей КЛ2 составил 201±55 мкм, длина суспензора – 1169±157 мкм. Зародыши этой линии успешно созревали. У гибридной КЛ5 диаметр глобулы составил только 91±18 мкм, а длина суспензора

– 126±38 мкм. Зародыши у КЛ5 не созревали. Количество созревших соматических зародышей варьировало в расчете на 100 мг ЭМ (на 40-е сут. культивирования): от 2 шт у КЛ4 до 30 шт у КЛ6. Среди зрелых соматических зародышей были обнаружены зародыши с аномальнальным строением. Наиболее успешное прорастание соматических зародышей было отмечено у КЛ6 на базовой среде АИ без добавления витаминов и активированного угля, у которой прорастали 87,5% зародышей. У КЛ2 при таких же условиях культивирования прорастало только 56 % зародышей. У этой же линии при добавлении в базовую среду активированного угля (0,1 г/л) прорастание зародышей увеличивалось до 80%.

В результате проведенной работы по культивированию зародышей семян Larix sibirica были получены длительно пролиферирующие клеточные линии, исследованы их морфологические и цитологические особенности, и впервые получены 10-ти месячные регенеранты.

Секция 2

–  –  –

V.N. Sukachev Institute of Forest Siberian Branch of Russian Academy of Sciences, Krasnoyarsk, 660036, Akademgorodok, 50, bld.28, tel.: (391) 249-44-47, fax: (391) 243-36-86, e-mail: dolka1981@mail.ru Somatic embryogenesis is the powerful tool in selection programs, because it allows to generate a large number of clonal lines from seeds of valuable genotypes. Somatic embryogenesis and plantlets were obtained at different larch species and actively studied in European larch (Larix decidua) and its hybrids. Siberian larch occupies an extensive area in the territory of Siberia, however for it the irregularity of crops or their total absence is peculiar.

Besides trees of a Siberian larch are strongly damaged by larch bud midge. Therefore development of modern and innovative biotechnologies which allows to receive fast-growing, highly productive, resistant to pathogens trees is actual.

The objects of the study were 30-40 years old trees of Larix sibirica growing at the territory of the arboretum of the Institute of Forest (Krasnoyarsk) as well as at experimental base “Chornoe ozero” (Republic of Khakassia). The material for the experiments was immature zygotic embryos at the stage of cotyledons development. For somatic embryogenesis induction the AI media (patent № 2010114891) was used.

At the result of investigations it was found that the formation of embryonal-suspension mass in the callus occurred in 25-35 days. The high proliferation activity were obtained in eight cell lines (CL). Seven of them were obtained from mother tree 1C: CL 1 (2008), CL 2, 3, 4 (2009), CL 6, 7 (2011), CL 10 (2012), and one CL 5 (hybrid) was obtained as a result of control pollination of 1C genotype (Siberian larch) by pollen from Sukachev Larch genotype (2009).

The analysis of CL 2, 4, 5, 6, 7 showed that they kept their proliferation ability during 2years. CL differed on immature somatic embryos number in ESM. Long-term cultivation of cell lines (19-32 month) leads to the decreasing or losing of their embryogenic potential (in CL1 and CL3). The number of somatic embryos per 100 mg of ESM was 210-390 in CL2 and CL1 respectively. Proliferating embryogenic cell lines differed by embryological structure sizes (globule and suspensor of somatic embryo). The globule diameter of actively proliferating CL2 was 201±55 mkm, the suspensor length - 1169±157 mkm. The embryos of that line passed maturation successfully. In hybrid CL5 diameter of globule was 91±18 mkm, the suspensor length – 126±38 mkm. The embryos of the CL5 didn’t mature. The number of mature somatic embryos per 100 mg of ESM varies from 2 (in CL4) to 30 (in CL6) in 40 days of culturing.

There were found anomaly embryos among mature somatic embryo. Among mature somatic embryos, the embryos with an anomalnalny structure were found. The most successful germination of somatic embryos was noted at CL6 on the AI basal medium without addition of vitamins and activated carbon when germinated 87,5% of embryos. At CL2 under the same conditions of culturing germinated only 56% of germs. At the same line the addition of absorbent carbon (0,1 g/l) to basal medium caused increased of germination rate to 80%.

As a result of the carried-out work on culturing of embryos of Larix sibirica seeds were received long-term proliferation cell lines, their morphological and cytologic features are investigated, and 10-month plantlets ready to planting in the soil for the first time were received.

–  –  –

ВЛИЯНИЕ НИЗКИХ ПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ ТЕМПЕРАТУР НА

МОРФОГЕНЕЗ МИКРОСПОРОФИЛЛОВ LARIX SIBIRICA IN VIVO И IN VITRO

Иванова А.Н., ГоловановаТ.И.

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Сибирский федеральный университет», Красноярск, 660041, пр. Свободный, 79, факс: (391) 244-86-25, тел.

((391) 244-86-25, e-mail:

annaivanova_2000@mail.ru, tigolovanova@mail.ru Морфогенез как процесс развития многоклеточных организмов из одной клетки или группы клеток остается сложнейшей проблемой биологии. Одним из наиболее перспективных экспериментальных подходов к изучению особенностей морфогенеза растений является метод культуры in vitro изолированных мужских генеративных органов. Данный метод основан на использовании явления андроклинии in vitro, то есть феномена образования растений-регенерантов из морфогенетически компетентных микроспор. Показано стимулирующее действие внешних факторов, в частности низких положительных температур, на индукцию андроклинии у пшеницы.

Обнаружено что воздействие низкими положительными температурами провоцирует отрыв микроспор от стенки пыльника, приводит к нарушению морфогенетических корреляций, изменению структурной организации микроспор и тем самым нарушает целостность пыльника как интегрированной системы. Однако влияние данного фактора на голосеменных растениях не достаточно изучено, что и явилось предпосылкой для изучения влияния низких положительных температур на морфогенез микроспорофиллов Larix sibirica in vivo и in vitro.

Объектами исследования служили 40-летние деревья лиственницы сибирской, произрастающие на территории экспериментальной базы Института леса СО РАН г. Красноярска.

Производился сбор микростробилл в период с октября по май. 1 вариант: микростробиллы, взятые с деревьев, произрастающих в естественных условиях; 2 вариант: часть микростробилл были обработаны низкими положительными температурами в течении 3 сут., а затем микроспорофиллы, выделенные из них, помещены на среду без регуляторов роста; 3 вариант: часть микроспорофилл, выделенных их микростробилл, не обработанных температурным фактором, были помещены на среду без регуляторов роста. Проводили биохимический анализ микроспорофилл Larix sibirica на разных стадиях развития.

В первом варианте отмечено, что в октябре микроспорофиллы находятся в профазе I на стадии диплотены, у которых содержание белков и углеводов составляло 2,1 % 4,5 %, соответственно, в декабре отмечена та же закономерность, в апреле микроспорофиллы уже находятся на стадии интерфазы и около 6 % образуют тетрады. Во втором варианте у микроспорофилл в октябре ускоряется процесс мейоза, у них на четырнадцатые сутки культивирования шло образование пыльцевой трубки. В микроспорофиллах наблюдалось уменьшение суммарного содержания белков и углеводов в первые трое суток, а далее отмечалось незначительное увеличение данных метаболитов. В зимние сроки культивирования отмечено снижение интенсивности мейоза, микроспор образовалось в 5 раз меньше, чем в октябре, хотя содержание белков и углеводов находилось на том же уровне, что и в октябре. В апреле у микроспорофиллов на третьи сутки культивирования идет 100 % образование микроспор, которые на 7 сутки дают пыльцевые трубки и данный процесс сопровождается активным образованием белков и углеводов. У третьего варианта в октябре к концу второй недели культивирования произошло образование микроспор, содержание белков и углеводов не менялось в течение данного периода. Такие же изменения наблюдаются и у микроспорофиллов собранных в декабре. В апреле уже на третьи сутки идет 100 % образование микроспор, но образование пыльцевых трубок не происходит.

Таким образом, низкие положительные температуры можно использовать в качестве к фактора, регулирующего процесс мейоза у Larix sibirica в условиях in vitro.

Секция 2

EFFECT OF LOW TEMPERATURE ON POSITIVE MORPHOGENESIS

MICROSPOROPHYLLS LARIX SIBIRICA IN VIVO AND IN VITRO

Ivanova A.N., Golovanova T.I.

Siberian Federal University, Krasnoyarsk, 660041, Svobodny Prospect, 79, fax: (391) 244-86tel. ((391) 244-86-25, e-mail: annaivanova_2000@mail.ru, tigolovanova@mail.ru Morphogenesis as the development of multicellular organisms from single cells or groups of cells are difficult problems of biology. One of the most promising experimental approaches to the study of the features of plant morphogenesis is the method of in vitro culture of isolated male generative organs. This method is based on the phenomenon androklinii in vitro, that is, the phenomenon of formation of regenerated plants of morphogenetic competent microspores. Shows the stimulatory effect of external factors, such as low positive temperature on the induction androklinii in wheat. Found that exposure to low positive temperatures provokes separation of microspores from anther wall, leads to disruption of morphogenetic correlations change the structural organization of microspores and violates the integrity of the seal, as an integrated system. However, the influence of this factor on gymnosperms not quite understood, that was a prerequisite for the study of the effect of low temperatures on the positive morphogenesis microsporophyll Larix sibirica in vivo and in vitro.

The objects of the study were 40 years of Siberian larch trees growing in the experimental facilities of the Institute of Forest SB RAS, Krasnoyarsk. Mikrostrobill were collected from October to May. Option 1: mikrostrobilly taken from trees growing in the wild, and 2 option: part mikrostrobill were processed low positive temperature for 3 days., Then microsporophylls derived from them, are placed on the medium without growth regulators, 3 version: part microsporophylls, isolated from mikrostrobill not treated temperature factor, were placed on the medium without growth regulators. Performed biochemical analysis microsporophylls Larix sibirica in various stages of development.

In the first case noted that in October microsporophylls are in prophase I in the diplotene stage, in which the content of protein and carbohydrates was 2.

1% 4.5%, respectively, in December marked by the same law, in April microsporophylls already on the interphase and about 6% form tetrads. In the second variant in microsporophylls in October accelerated process of meiosis in their fourteenth day of cultivation went pollen tube formation. In microsporophylls observed decrease in total protein and carbohydrates in the first three days, and then showed a slight increase in these metabolites. In the winter time cultivation decreased intensity of meiosis, microspores formed 5 times less than in October, although the content of protein and carbohydrates is at the same level as in October. In April, a microsporophyll on the third day of cultivation is 100% formation of microspores that on the 7th day allow pollen tube and the process is accompanied by the active form of proteins and carbohydrates. The third option in October to the end of the second week of cultivation has created, microspores, protein and carbohydrates did not change during this period. Similar changes are observed in microsporophyll collected in December. In April, on the third day is 100% microspore formation, but the formation of pollen tubes occurs.

Thus, low positive temperatures can be used as a factor regulating the process of meiosis in Larix sibirica in vitro.

–  –  –

ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ НЕТРАДИЦИОННЫХ РЕГУЛЯТОРОВ РОСТА НА

МОРФОГЕНЕТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ИЗОЛИРОВАННЫХ ЭКСПЛАНТОВ И

ПЕРЕСАДОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ БЕРЕСКЛЕТА, ДИОСКОРЕИ И КИРКАЗОНА

Калашникова Е.А., Доан Тху Тхуи Российский государственный аграрный университет-МСХА имени К.А. Тимирязева, Москва, 127550, ул. Тимирязевская, д. 49, кафедра генетики и биотехнологии, тел. 8(499) 976-40-72, e-mail: kalash0407@mail.ru Существующие для травянистых растений традиционные методы клонального микроразмножения нельзя применять без серьезных корректировок для древесных пород.

При размножении древесных растений in vitro встречается множество трудностей на всех этапах микроразмножения, начиная с получения стерильной культуры эксплантов, дальнейшего размножения и кончая этапом укоренения. Для кустарниковых пород, в частности, для бересклета карликового (Euonymus nana Bieb.) и многолетних лиан диоскореи кавказской (Dioscorеa caucasica Lypsky), диоскореи ниппонской (Dioscorea nipponica Makino) и кирказона маньчжурского (Aristolochia manshuriensis Kom.), указанные сложности значительно усиливаются.

Формообразовательные процессы в условиях in vitro происходят при наличии в составе питательной среды биологически активных веществ, таких как регуляторы роста, аминокислоты, растительные экстракты и др. Однако применение традиционных, широко используемых веществ не всегда приводит к получению положительного результата.

Поэтому поиск или создание новых отечественных высокоэффективных нетоксичных регуляторов роста остается актуальной проблемой не только для сельского хозяйства, но и для биотехнологии растений.

К таким веществам относится препарат Мицефит, а также вещества с цитокининовой активностью Дропп и Цитодеф.

Изучено влияние нетрадиционных регуляторов роста Дропп, Цитодеф и Мицефит на морфогенетическую активность изолированных органов и пересадочную культуру бересклета карликового (Euonymus nana Bieb.), диоскореи кавказской (Dioscorеa caucasica Lypsky), диоскореи ниппонской (Dioscorea nipponica Makino) и кирказона маньчжурского (Aristolochia manshuriensis Kom.). Установлено, что присутствие в составе питательной среды препаратов Цитодеф и Дропп в концентрации 0,01 мг/л стимулировало процесс индукции образования адвентивных почек, формирование микропобегов или микроклубней и увеличивало коэффициент размножения. Выявлено, что длительное культивирование микропобегов бересклета карликового на средах, содержащих препарат Мицефит в концентрации 10-6 мг/л, приводило к формированию побегов не только первого порядка, но и побегов второго и третьего порядка, а также активизировался процесс ризогенеза. Для растений диоскореи в этих условиях культивирования формирование микроклубней наступало в два раза быстрее, по сравнению с контрольным вариантом.

–  –  –

STUDYING OF INFLUENCE OF NONCONVENTIONAL REGULATORS OF

GROWTH ON MORPHOGENETIC ACTIVITY ISOLATED EXPLANTS AND

TRANSFER CULTURE OF THE EUONYMUS, DIOSСOREА AND ARISTOLOCHIA

Kalashnikova E.A., Doan Thu Thuy Russian State Agrarian University – Moscow Agricultural Academy named after K.A.Timiryazev, 127550, st. Timiryazevskaya, 49, Department of Genetics and Biotechnology, Tel. 8 (499) 976-40-72, e-mail: kalash0407@mail.ru Existing for traditional herbs clonal micropropagation cannot be applied without major adjustments to trees. When propagating woody plants in vitro meets many difficulties at all stages of micropropagation such as: receiving sterile culture explants, further breeding and finishing stage of rooting. For shrub species, in particular, for Euonymus nana Bieb.; perennial vines –as Dioscorea caucasica Lipsky, Dioscorea nipponica Makino and Aristolochia manshuriensis Kom., the difficulties is greatly enhanced.

Morphogenetic processes in vitro conditions occurred in the culture medium of biologically active substances such as growth regulators, amino acids, plant extracts, etc.

However, traditional application, widely used substances, does not always lead to receiving positive result. Therefore, search or creation a new national highly effective nontoxical regulators of growth remains an actual problem, not only for agriculture but also for biotechnology of plants.

These substances include preparation Mitsefit and substances with cytokinins activity as Dropp and Tsitodef.

Influence of nonconventional regulators of growth Dropp, Tsitodef and Mitsefit on morphogenetic activity of isolated organs and transfer culture of Euonymus nana Bieb.;

Dioscorea caucasica Lipsky; Dioscorea nipponica Makino and Aristolochia manshuriensis Kom.

It is established that presence of preparations Tsitodef and Dropp at 0.01 mg / l in the culture medium stimulated process of induction adventitious buds, formation microshoots or microtubers and increased the rate of reproduction. Found that, long-term cultivation of microshoots Euonymus nana Bieb. on medium containing preparation Mitsefit in concentration of 10-6 mg/l, resulted in the formation of shoots not only the first order, but shoots second and third order, as well as to intensify the process rhizogenesis. The formation of microtubers of yam plants, which cultivated in these conditions, occurred in half the time, compared to the control.

–  –  –

ПОЛУЧЕНИЕ ГАПЛОИДНЫХ РАСТЕНИЙ БЕЛОКОЧАННОЙ КАПУСТЫ

(BRASSICA OLERACEA L) ИЗ МИКРОСПОР ИЗОЛИРОВАННЫХ ПЫЛЬНИКОВ

Калашникова Е.А., Киракосян Р.Н.

Российский государственный аграрный университет-МСХА имени К.А. Тимирязева, Москва, 127550, ул. Тимирязевская, д. 49, кафедра генетики и биотехнологии, тел. 8(499) 976-40-72, e-mail: kalash0407@mail.ru Белокочанная капуста (Brassica oleracea L.) - наиболее распространённая овощная культура в Российской Федерации, которую в настоящее время выращивают на площади 161,7 тыс. га. Однако данная культура подвержена многочисленным заболеваниям и поэтому выведение сортов, обладающих единичной, групповой или комплексной устойчивостью является актуальной проблемой. Применение методов биотехнологии, и в частности, создание гаплоидных растений in vitro позволяет решить данную проблему за более короткий срок.

Объектом исследования служили изолированные пыльники и микроспоры белокочанной капусты (гибрид F1 Юбилей, линии ЭТ1 и АМФ 3Л). Стерилизацию бутонов проводили по методике, разработанной на кафедре генетики и биотехнологии РГАУ-МСХА. В работе изучали влияние предобработки бутонов, состава питательной среды и условий культивирования на процессы прямого эмбриогенеза.

В результате проведенных исследований были оптимизированы этапы получения растений-регенерантов путем прямого эмбриогенеза из микроспор изолированных пыльников. Предложена схема комплексной предобработки соцветий пониженными (+4-60С в течение 2-х суток) и повышенными (+320С в течение 1-х суток) температурами в сочетании с обработкой соцветий нитратом серебра (40 мг/л). Установлено, что присутствие в питательной среде Мурасиге и Скуга НУК в концентрации 1мг/л и Дропп – 0,01 мг/л стимулировало процесс прямого эмбриогенеза (4,2%). Дальнейшее культивирование эмбриоидов приводило к формированию растений-регенерантов, которые были перенесены в условия открытого грунта. Проведенный цитологический анализ растенийрегенерантов (подсчет числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и хромосом в меристеме корня) подтвердил их гаплоидную природу.

–  –  –

Russian State Agrarian University – Moscow Agricultural Academy named after K.A.Timiryazev, 127550, st. Timiryazevskaya, 49, Department of Genetics and Biotechnology, Tel. 8 (499) 976-40-72, e-mail:kalash0407@mail.ru Cabbage (Brassica oleracea L.) - the most common vegetable crop in the Russian Federation, which is now grown on the area of 161.7 hectares. However this crop is exposed to large diseases and therefore breeding varieties having a single, group or complex resistance is an important issue. Using of biotechnological methods and in particular, the obtaining haploid plants in vitro allows us to solve this problem in a shorter time.

Objects of our research were isolated anthers and microspores of cabbage (F1 hybrid Jubilei, line ET1 and AMF 3L). Sterilization of buds was carried out by the method developed at the Department of Genetics and Biotechnology RGAU-ICCA. We studied the effect of preprocessing of buds, composition of nutrient medium and cultivation conditions on the processes of direct embryogenesis.

In the result of research were optimized steps of obtaining regenerated plants by direct embryogenesis from microspores of isolated anthers. Suggested a scheme for integrated of preprocessing of inflorescences reduced (+4-60 C for 2 days) and elevated (320 C for 1-days) temperatures, combined with the processing of inflorescences with silver nitrate (40 mg / L).

Found that the presence in the medium Murashige and Skoog medium of NAA in a concentration 1 mg / l and Dropp - 0.01 mg / l stimulated the process of direct embryogenesis (4.2%). Further cultivation of embryoids led to the formation of regenerated plants, which were transferred to the open ground. Cytological analysis of regenerated plants (counting the quantity of chloroplasts in stomatal guard cells and chromosomes in root meristem) confirmed their haploid nature.

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центральный сибирский ботанический сад Сибирского отделения РАН, Россия, Новосибирск, 630090, ул.

Золотодолинская, 101, тел.: +7(383)330-41-01, факс: +7(383)334-44-33, e-mail:

dinarakulkhanova@yandex.ru, annaerst@yandex.ru, tin27@mail.ru Эффективные системы регенерации in vitro с использованием клеточных и тканевых культур являются предпосылкой для биотехнологических программ по сохранению, размножению и улучшению свойств растений. Хотя целое растение может быть регенерировано различными путями из разных типов эксплантов, соматический эмбриогенез является наиболее полной морфогенетической схемой развития растения.

Соматический эмбриогенез определяется как неполовое развитие, приводящее к формированию зиготических эмриоподобных структур из соматических клеток растения.

Преимущество соматического эмбриогенеза заключаются в возможности получения генетически идентичных соматических эмбриоидов, поскольку отсутствует генетическая рекомбинация, происходящая во время мейоза при половом размножении. Кроме того, это быстрый, надежный, воспроизводимый метод для массового размножения растений.

Fritillaria dagana и F. sonnikovae – редкие многолетние растения, принадлежащие к сем. Liliaceae, большинство видов которого распространено в умеренной зоне северного полушария. Все виды рода Fritillaria содержат разнообразные алкалоиды и широко применяются в традиционной китайской медицине. Fritillaria dagana и F. sonnikovae высоко декоративны, обладают привлекательной окраской цветов и ранним цветением.

Размножение этих видов традиционными способами ограничено из-за низкой всхожести семян и слабого вегетативного размножения. В связи с этим разрабатываются эффективные способы воспроизводства рябчиков, в том числе с использованием культуры тканей и органов растений in vitro.

Цель работы – индуцировать соматический эмбриогенез в тканях луковичных чешуй Fritillaria dagana и F. sonnikovae.

Исходным материалом для введения в культуру in vitro послужили луковицы Fritillaria dagana и F. sonnikovae. Культивирование растительного материала проводили по общепринятым методикам Р.Г. Бутенко (1964), Ф.Л. Калинин и др. (1980). Развитие эмбриоидов исследовали на постоянных микроскопических препаратах по методике З.П. Паушевой (1986). Полученные при культивировании in vitro морфогенные структуры и динамику их развития анализировали с помощью стереомикроскопа Carl Zeiss Stereo Discovery V 12 (с цветной цифровой программой AxioVision 4.8 для получения, обработки и анализа изображений) (Carl Zeiss, Germany).

В ходе работы установлено, что для изучаемых видов возможно развитие по пути соматического эмбриогенеза. При длительном культивировании F. dagana на среде Гамборга (В5) с 5 мкМ НУК формируется каллус, который проявляет морфогенную активность. В дальнейшем для развития соматических эмбриоидов каллус необходимо культивировать на среде с 5,0 мкМ БАП. F. sonnikovae образует плотную каллусную культуру на среде Данстена и Шорта (BDS), характеризующуюся высокой эмбриогенной активностью, в том числе без регуляторов роста.

–  –  –

Federal State Institution of Science Central Siberian Botanical Garden, Siberian Branch RAS,

Russia, Novosibirsk, 630090, Zolotodolinskaya st., 101, tel.: +7(383)330-41-01, fax:

+7(383)334-44-33, e-mail: dinarakulkhanova@yandex.ru, annaerst@yandex.ru, tin27@mail.ru An efficient in vitro regeneration system with cell and tissue cultures is a prerequisite for biotechnological applications to plant improvement programs. Although whole plants can be regenerated by several ways from various species and explants, somatic embryogenesis is one of the most powerful morphogenetic of schemes plant development. Somatic embryogenesis is defined as a nonsexual developmental process resulting in differentiating of zygotic embryo-like structures from plant somatic cells. The advantage of somatic embryogenesis is to obtain genetically identical somatic embryos since there is no genetic recombination occurring during meiosis in sexual reproduction. Moreover, it is a fast, reliable, reproducible method for mass plant propagation.

Fritillaria dagana and F. sonnikovae are rare perennial plants, belonging to Liliaceae family mainly distributed throughout temperate climates of the Northern Hemisphere. All Fritillaria species contain variety of alkaloids with interesting phytochemical properties. They are widely used in traditional Chinese medicine. Fritillaria dagana and F. sonnikovae are highly ornamental and have attractive flowers which open in early spring. Plant propagation of this species by conventional methods is limited due to low germination of seeds and poor vegetative one. In connection with these effective methods of propagation of Fritillaria species have been developing, including using in vitro tissue culture and plant organs.

The aim of this work is to induce the somatic embryogenesis in bulb scale culture of Fritillaria dagana and F. sonnikovae.

The bulbs Fritillaria dagana and F. sonnikovae were starting material for the initiation of in vitro culture. The cultivation of the plant material was carried out by conventional methods, R.G. Butenko (1964), F.L. Kalinin et al (1980). The development of embryos was studied for permanent microscopic preparations by the method of Z.P. Pausheva (1986). The morphogenic structures have been obtained by in vitro culture and dynamics of their development has been analyzed with Carl Zeiss Stereo Discovery V 12 stereomicroscope with color digital AxioVision 4.8 software for taking, processing and analysis of images (Carl Zeiss, Germany).

The development along somatic embryogenesis concerning the species under study seems to have been established. Callus developing morphogenic activity can form under the long-term cultivation F. dagana on medium Gamborg (B5) with 5 mM NAA. Further for the development of somatic embryos callus needs to be cultivated in a medium with 5.0 mM BAP.

F. sonnikovae forms a dense callus culture on medium Dunstan and Short (BDS), exhibiting high embryogenic activity, without growth regulators.

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Казанский институт биохимии и биофизики Казанского научного центра РАН, Казань, 420111, ул.

Лобачевского, 2/31, факс: (843) 292-73-47, тел. (843) 231-90-39, e-mail: pzl@mail.ru Процесс образования латеральных корней, которые в совокупности формируют архитектуру корня, представляет собой определенную последовательность событий, включающих деление инициальной клетки, развитие примордия и активной меристемы, из клеток которой продуцируется корень. На данный момент основное ограничение при исследовании корнеобразования остается плохая осведомленность об индукторах данного процесса. Ведущую роль в нем отводится ауксину. К настоящему времени выявлены ИУК-индуцируемые гены и получены мутанты по отдельным стадиям развития корня, однако инициация и регуляция ранних событий, таких как, например спецификация “founder cells” остаются самым интригующим моментом формирования боковых корней. Поиск эндогенных факторов, участвующих в активации инициальной клетки, является на данный момент наиболее актуальной проблемой при исследовании ризогенеза. Такую роль могут выполнять фрагменты клеточной стенки, обладающие биологической активностью (олигосахарины), участие которых в процессах регуляции роста и развития растений уже не вызывает сомнения.

В нашей лаборатории была разработана методика получения эндогенных олигосахаринов из буферорастворимой фракции клеточной стенки проростков гороха, в основе которой лежит многоступенчатая хроматографическая очистка данной фракции. Объектом исследования служили экспланты, полученные из листьев и сегменты гипокотилей трансгенных растений табака (Nicotiana tabacum L. сv Petit Havana SR1), содержащих репортерный ген GUS из Escherichia coli (ген, кодирующий фермент -глюкуронидазу), под контролем ауксин-индуцируемого промотора гена RolB из Agrobacterium rhizogenes. Экспрессия GUS при обработке экзогенным ауксином вызывает образование фермента, гидролизующего субстрат (4-метилумбеллиферилглюкуронид) при расщеплении которого выделяются флуоресцирующие продукты. Следовательно, активность фермента, оцениваемая по интенсивности флуоресценции, фактически является детектором действия ауксина. Наличие маркерного гена позволило охарактеризовать как ранние (по GUS-активности), так и завершающие (по числу образованных корней) стадии ризогенеза. Исследование динамики глюкуронидазной активности в процессе формирования корней на эксплантах выявило наличие двух пиков активности фермента при 3 мкМ ИУК. Гистологический анализ с использованием сегментов гипокотилей показал, что первый пик совпадает с образованием 5-6-слойных примордий, которые впоследствии не всегда развиваются до стадии зрелого корня. Второй пик, по всей вероятности, совпадает со стадией зрелой меристемы, которая сама является продуцентом ауксина. Полученный препарат олигосахарина повышал ИУК-индуцируемое количество корней, при одновременном внесении с гормоном в среду культивирования. Однако, наибольший эффект достигался при краткосрочной обработке эксплантов олигосахарином до добавления гормона. При этом отмечалось не только увеличение, но и ускорение ответной реакции по GUS-активности, а именно смещение первого пика влево, к началу культивирования эксплантов. Положение второго пика при этом не менялось. Таким образом, полученные данные указывают на то, что действие олигосахарина предшествует действию гормона на ранних этапах ризогенеза.

Дальнейшие исследования, касающиеся определения состава и структуры полученного олигосахарина, а также гистологические и биохимические исследования с привлечением методов молекулярной биологии позволят лучше понять механизм ИУК-индуцируемого формирования корней и определить роль в этом процессе эндогенных олигосахаринов.

–  –  –

Kazan Institute of Biochemistry and Biophysics Kazan Scientific Center of the Russian Academy of Sciences, 420111, Lobachevsky str., 2/31, Kazan, Russia.

fax: (843) 292-73-47, ph. (843) 231-90-39, e-mail: pzl@mail.ru The process of lateral roots formation which in common form root architecture represents a certain sequence of events: initial cell division, primordia development and form an active meristem from which the root is produced. At present the main restriction at research of a rooting remains bad awareness about inductors of this process. The leading role in this process it is allocated for auxin. So far IAA-induced genes are revealed and mutants of different stages root developments are received, however initiation and regulation of early events, for example the "founder cells" specification remain the most intriguing moment of lateral root formation.

Searching of the endogenous factors participating in initial cell activation is at present the most actual problem at research of rhizogenes. The fragments of a cell wall possessing biological activity (oligosaccharins) can carry out such role because their participation in processes of regulation of growth and development of plants doesn't raise doubts any more.

In our laboratory the technique of receiving endogenous оligosaccharins from bufferdissolved fraction of a cell wall of pea shoots was development which is based on multistage chromatographic methodology of cleaning of this fraction. As object of research we use the leaf explants and hypocotyl segments of transgenic tobacco plants (Nicotiana tabacum L. cv Petit Havana SR1) expressing the reporter gene GUS (-glucuronidase from Escherichia coli) under the control of auxin-inducible promoter rolB from Agrobacteriun rhizogenes. Expression of GUS-protein induced by treatment with exogenous auxin can be estimate by cleaving fluorescent substrate (4-methylumbelliferylglucuronidase) and measuring the released fluorescence. Hence, the activity of auxin can be estimated by the amount of released fluorescence. Existence of a marker gene allowed to characterize both early (on GUS activity) and finishing (on roots number) stages of rooting. Research of dynamics of glucuronidase activity in the course of formation of roots on explants revealed existence of two peaks of activity of enzyme at 3 mkM IAA. The histological analysis with use of hypocotyl segments showed that the first peak coincides with formation of 5-6-layer primordia which not always develops subsequently to a stage of a mature root. The second peak, most likely, coincides with a stage of a mature meristem which itself is an auxin producer. The received oligosaccharin increased IAA-induced quantity of roots when add together with a hormone on medium of cultivation. However, the greatest effect was reached at short-term treatment of explants by oligosaccharin before hormone addition. Thus it was noted not only increase, but also acceleration the response on GUS activities, namely shift of the first peak to the left; by the beginning of cultivation of explants. The provision of the second peak thus didn't change. The obtained data specify that oligosaccharin action precedes hormone action at early stages of rhizogenes.

Further histological and biochemical researches with attraction of methods of molecular biology will allow to better understand mechanism of IAA-induced roots formation and to define a role in this process endogenous oligosaccharin.

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение Мичуринский государственный аграрный университет, Мичуринск, 393760, ул. Интернациональная, 101, факс (47545) 5-26-35, тел. (47545) 5-31-37, e-mail: smuratova@yandex.

ru Рассмотрены вопросы индукции морфогенеза из изолированных соматических тканей плодовых и ягодных культур. Анализ результатов исследований показал влияние на частоту регенерации адвентивных побегов генотипа, вида и концентрации регуляторов роста, углеводов, типа экспланта и его происхождения, ориентации на питательной среде и других факторов. В ходе изучения влияния минерального состава сред на частоту адвентивного морфогенеза установлено, что среда MS (Murashige, Skoog, 1962) является наиболее универсальной. На этой среде получены адвентивные побеги у всех включенных в наши исследования генотипов. Использовали пять углеводов – сахарозу, глюкозу, мальтозу, фруктозу, лактозу. Наиболее активно стимулировали образование и рост каллуса и дифференциацию адвентивных почек и побегов глюкоза и сахароза при концентрации углевода в среде 30 и 40 г/л. Изучали влияние на морфогенез ягодных и плодовых культур цитокининов и ауксинов в различных сочетаниях и соотношениях. Применение 6-БАП оказалось более эффективным, чем добавление в среду кинетина, зеатина или 2-iP. Для большинства видов и сортов представителей рода Rubus наибольшая частота морфогенеза из листовых эсплантов достигнута с применением 2,0 -3,0 мг/л 6-БАП в сочетании с 0,5 мг/л ИУК или ИМК. Максимальная частота прямой регенерации наблюдается на средах, содержащих ИМК. На средах с 2,4-Д, получили наибольшее число форм, несущих сомаклональные изменения. Наивысшая частота регенерации адвентивных побегов плодовых культур получена на средах, содержащих 6-БАП или ТДЗ в концентрации 4,0мг/л в сочетании с одним из ауксинов. Оптимальное соотношение цитокинин : ауксин в питательной среде составляет не менее 10:1. Наибольшее число побегов-регенерантов на один эксплант образуется, если регенерация происходит с образованием значительных масс морфогенного каллуса как у сливы сорта Стартовая. В этом случае число адвентивных побегов-регенерантов на один листовой диск может доходить до 20 и более.

При оптимальном возрасте листовой ткани максимальная частота регенерации адвентивных побегов сливы сорта Стартовая составляет 90-95%, клоновых подвоев яблони – 70-80%. Ризогенез легко проходит и при использовании каллусов, полученных из тканей растений, находящихся в культуре длительное время. На средах, содержащих 0,5-1,0 мг/л ауксина и 1,0-2,0 мг/л тидиазурона или зеатина, корни формировались в массовом порядке. Например, на среде с 0,5 мг/л НУК и 2,0 мг/л зеатина, 100% эксплантов вишни сорта Жуковская формировали хорошо развитые корни с корешками второго и третьего порядка, количество их на эксплант доходило до 15-20. Изучали влияние типа исходного экспланта на частоту адвентивной регенерации. Листовые экспланты оказались лучшими при работе с плодовыми и ягодными культурами.

Основания листьев с черешками с дистальной части побега были оптимальным типом эксплантов для регенерации побегов. По нашим данным, если использовать листовые ткани одной физиологической зрелости, нет существенной разницы с каких (укорененных или неукорененных) побегов они срезаны. В наших опытах использование листового материала, срезанного с растений открытого грунта, позволило значительно повысить частоту регенерации побегов сливы и абрикоса по сравнению с растениями, культивируемыми in vitro. Ориентация листьев на среде также важна. Лучшие результаты получены при помещении листовых эксплантов адаксиальной стороной к поверхности питательной среды.

Секция 2

–  –  –

Michurinsk State Agrarian University Michurinsk, Russia 393760 Internationalnaya str., 101, fax (47545) 5-26-35, tel. (47545) 5-25-07, e-mail: smuratova@yandex.ru Methods of regeneration of isolated tissues are the basis of biotechnological methods aimed at increasing the genetic diversity of agricultural crops. Problems of morphogenesis' induction from isolated somatic tissues of fruit and berry cultures were studied. The analysis of experimental results showed the influence of genotype, type and concentration of the growth regulators, carbon, optimum explants' type and its origin, orientation on medium and other factors on the frequency of adventitious shoot regeneration.

In the course of studying the influence of the mineral composition of the media on the frequency of adventitious morphogenesis it has been found that the medium MS (Murashige, Skoog, 1962) is the most universal produced Adventitious shoots of all included in our study genotypes have been on this medium. Five carbohydrates are used sucrose, glucose, maltose, fructose, lactose. In our experiments, glucose and sucrose at a carbohydrate concentration of 30 and 40 g/l stimulated the formation and growth of callus and differentiation of adventitious buds and shoots the most actively. We conducted a study of the effect cytokinin and auxin in various combinations and proportions on the morphogenesis of the berry and fruit crops. Using 6-BAP was more effective than making a medium kinetin, zeatin or 2-izopentiladenin. For most species and varieties of genus Rubus highest frequency of leaf morphogenesis is achieved using 2.0 -3.0 mg/l 6-BAP in combination with 0.5 mg /l of IAA or IBA. The maximum frequency of direct regeneration is observed in the media containing IBA. On media containing 2,4-D there have been received by the maximum forms bearing somaclonal changes. The best regeneration for fruit crops was observed on media containing 6-BAP or TDZ at a concentration of 4.0-5.0 mg/l in combination with one of the auxin. The optimum ratio of cytokinin: auxin in the medium is at least 10:1. The highest mean number of shoots regenerated per explant formed if the recovery proceeds with the formation of large masses of morphogenic callus like a plum varieties“Startovaya’’. In this case the number of adventitious shoots regenerated per leaf disc may reach 20 and more. At the optimum age of leaf tissue maximum frequency of regeneration is 90-95% plum varieties“Startovaya’’and 70-80% of clonal apple rootstocks. Rhizogenesis is easily held also using calli derived from plant tissues, which are culture for prolonged time. On media containing 0.5-1.0 mg/l auxin and 1.0-2.0 mg/l zeatin or thidiazuron, roots were formed en masse. For example, a medium with 0.5 mg/l NAA and 2.0 mg/l zeatin, 100% explants cherry varieties Zhukovskaja formed well developed roots, its number per explants’ reached 15-20.

We studied the influence of explant source type the on frequency of adventitious shoots regeneration. Leaf explants were the best when working with fruit and berry cultures. The bases of leaves with petioles from distal part of the shoot were the optimal explants for shoot regeneration. According to our data, if you use the leaf tissue of the same physiological maturity, there is no significant difference from what kind of shoots (rooted or unrooted) they are cut off.

In our experiments, the use of leaf material cut off from the plant in the open ground significantly increases the frequency of shoot regeneration of plum and pineapple varieties compared to plants cultivated in vitro. However the results were not consistently reproducible data, moreover, they are largely determined by the age of the leaf tissue, allowing the taking of leaves growing in vivo, only a short period of time. The position of the leaves in the culture medium was also impotant. The best results were obtained when the leaves were placed with their adaxial side in contact with the medium surface. Studying the influence of different factors on the efficiency of plant regeneration in vitro we obtained the data, which suggest that the appropriate optimization of the nutrient media, culturing conditions and selecting the correct explants allows achieving morphogenesis of almost any genotype.

Секция 2

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт цитологии и генетики СО РАН, Новосибирск, 630090, пр.

Академика Лаврентьева, 10, факс:

+7(282)333-12-78;

тел: +7(383) 363-49-27, e-mail: kort_t@mail.ru Культивирование пыльников является наиболее распространенным методом получения дигаплоидных (гомозиготных) линий. У гомозиготных организмов действие рецессивных генов проявляется наряду с доминантными, поэтому при работе с ними значительно сокращается время отбора целевых генотипов. В этом отношении интерес для фундаментальных исследований и практических целей представляют дигаплоидные линии, носители чужеродного генетического материала с генами, определяющими устойчивость к биотическим и абиотическим факторам. В данной работе были изучены особенности андрогенеза у сортов и перспективных форм яровой мягкой пшеницы, созданных в Западной Сибири и несущих генетический материал, интрогрессированный от других видов злаков. В работу были включены генотипы с пшенично-ржаной транслокацией 1RS.1B (с кластерами генов Lr26/Sr31/Yr9/Pm9); сорта, сочетающие пшенично-ржаную транслокацию 1RS.

1B и пшенично-пырейную транслокацию 7DL-7Ai (носитель генов Lr19/Sr25); формы гибридного происхождения, имеющие помимо выше приведенных пшенично-чужеродных транслокаций, генетический материал от T.timopheevii и T.tauschii, и от H.marinum ssp.gussoneanum. Для разных генотипов подобраны условия предкультивирования и культивирования пыльников и эмбриоподобных структур. Установлено, что реакция пыльников на условия культивирования, частота образования эмбрио-подобных структур и зеленых проростков определяется влиянием чужеродного генетического материала в зависимости от генотипической среды изученных генотипов пшеницы, а также условий выращивания растений-доноров.

Спонтанное образование дигаплоидов в процессе культивирования эмбрио-подобных структур не зависит от генотипа. Выделены формы гибридного происхождения и сорта мягкой пшеницы с высоким потенциалом к андрогенезу в культуре пыльников. Получено многообразие дигаплоидных линий, включенных в селекционный процесс и используемых в качестве моделей для генетических исследований.

–  –  –

THE EFFECT OF ALIEN GENETIC MATERIALS TO ANDROGENESIS IN

VITRO OF COMMON WHEAT

Osadchaya T.S., Pershina L.A., Devyatkina E.P.

Institute of Cytology and Genetics, SB RAS, Novosibirsk, 630090, Academic Lavrentiev Av.

10, fax +7(282)333-12-78; tel: +7(383) 363-49-27, e-mail: kort_t@mail.ru Anther culture is the most common method of obtaining doubled haploid (homozygous) lines. The effect of recessive genes in homozygous organisms manifests itself along with the dominant genes, so when you work with them significantly reduces the time of selection of target genotypes. In this regard, doubled haploid lines carrying alien genetic material with the genes that determine resistance to biotic and abiotic factors are of interest to fundamental research and practical purposes. In this work we have studied the characteristics of androgenesis in varieties and promising forms of spring wheat, created in Western Siberia and carrying an alien genetic material that has been transferred from other cereals. The genotypes with wheatrye translocation 1RS.1B (with clusters of genes Lr26/Sr31/Yr9/Pm9), varieties with the wheatrye translocation 1RS.1B and wheat-wheatgrass translocation 7DL-7Ai (the carrier of genes Lr19/Sr25); hybrid forms which in addition to the above mentioned wheat-alien translocation have a genetic material from T.timopheevii, T.tauschii and H.marinum ssp.gussoneanum. The conditions precedent to the cultivation of anthers, conditions of anther culture and embryo-like structures for the different genotypes were selected. In was found that the reaction of anther to the culture conditions, the frequency of formation of embryonic-like structure and green seedlings are influenced by alien genetic material depending on the background of wheat genotypes and the conditions of donor plant cultivation. It was shown that spontaneous formation of doubled haploids during cultivation of embryo-like structures is not dependent on genotype. The hybrid genotypes and varieties of common wheat with a high potential for androgenesis in anther culture were revealed. A number of doubled haploid lines received in this research were included in breeding and genetic investigation.

–  –  –

Федеральное государственное учреждение науки Центральный сибирский ботанический сад Сибирского отделения Российской академии наук, Новосибирск, 630090,

Золотодолинская, 101, тел. +7(383)330-41-01, факс: +7(383)334-44-33, e-mail:

tin27@mail.ru Disanthus cercidifolius Maxim. декоративный листопадный вид из семейства Hamamelidaceae, природными местообитаниями которого являются леса Китая и Японии.

Этот кустарник известен благодаря сердцевидной форме листьев, которые осенью становятся темно-малиновыми, пурпурными и оранжевыми.

Disanthus cercidifolius размножают черенками, изолированными в середине лета, и семенами. Однако, традиционные методы размножения не могут удовлетворить растущие потребности рынка в этом высоко декоративном растении. Технологии in vitro являются альтернативным подходом в решении задачи быстрого и массового размножения ценных растений. В то же время работы по микроразмножению Disanthus cercidifolius единичны.

В течение последних десятилетий было синтезировано несколько соединений для индукции регенерационного потенциала растительной клетки. Одно из них, тидиазурон (ТДЗ), исходно было синтезировано для дефолиации хлопка. ТДЗ, замещенное соединение фенилмочевины (N-фенил-1,2,3-тиадиазол-5-илмочевина), является эффективным биорегулятором, который проявляет цитокининовую активность в различных системах, включая как органогенез, так и соматический эмбриогенез из различных эксплантов широкого круга видов растений.

Данное исследование было предпринято с целью определения влияния различных концентраций и способов обработки ТДЗ на образование побегов Disanthus cercidifolius in vitro.

В качестве эксплантов использовали пазушные почки. После стерилизации экспланты были помещены на среду МС, содержащую 0.5 мг л-1 БАП. Пролиферация побегов была достигнута на среде МС, дополненной 0.25, 0.5, 0.75 ТДЗ в течение 6 недель. Однако, продолжительное культивирование на средах содержащих ТДЗ индуцирует нарушения развития примордиев почек и побегов. Для преодоления мальформации экспланты предварительно обрабатывали 30 мкМ ТДЗ в течение 4 час и затем переносили на среду МС, содержащую 0.5 БАП. Гистологические и морфологические исследования выявили формирование множества примордиев адвентивных побегов. В результате был оптимизирован протокол регенерации побегов Disanthus cercidifolius с использованием предобработки ТДЗ. Обсуждаются последние достижения в области применения ТДЗ в культуре ткани растений.

–  –  –

Federal State Institution of Science Central Siberian Botanical Garden, Siberian Branch RAS,

Russia, Novosibirsk, 630090, Zolotodolinskaya st., 101, tel.: +7(383)330-41-01, fax:

+7(383)334-44-33, email:tin27@mail.ru Disanthus cercidifolius Maxim. is an ornamental deciduous species that belongs to the family Hamamelidaceae, it’s native to woodland habitats in China and Japan. This shrub is known for its heart-shaped leaves turning deep crimson, purple and orange in autumn.

Disanthus cercidifolius is propagated by cuttings isolated in the middle of summer or through seeds. However, the conventional methods cannot meet the increasing demand of this species as a highly ornamental plant. In vitro culture techniques are the alternative approach for a rapid and large-scale multiplication of valuable plants. At the same time very few studies have been carried out on micropropagation of Disanthus cercidifolius.

During the last decades several compounds have been synthesized to induce regeneration potential in plant cell. One of them is thidiazuron (TDZ) that was initially synthesized for defoliation of cotton. TDZ, a substituted phenylurea (N-phenyl-1, 2, 3 thidiazolylurea), is an effective bioregulant, which exhibits cytokinin like activity in various culture systems, including both organogenesis and somatic embryogenesis from different explants of a wide array of plant species.

This study has been performed to determine the effects of TDZ at various concentrations and methods of treatment on the in vitro shoot formation of Disanthus cercidifolius.

Axillary buds were used as explants. After sterilization explants were placed into MS medium supplemented with 0.5 mg.l-1BA. Proliferation of shoots was achieved on MS medium supplemented with 0.25, 0.5, 0.75 mg l-1TDZ. However, continuous culture on TDZ-containing media induced abnormal development of bud primordia and shoots. To avoid malformation the explants were pretreated with 30 M TDZ for 4h before proliferation stage and transferred to an MS medium supplemented with 0.5 mg.l-1 BA. Histological and morphological observations of explants revealed a numerous formation of adventitious shoots primordia. As the result we have successfully optimized shoot regeneration of Disanthus cercidifolius by TDZ pretreatment.

Recent advancements in TDZ application in plant tissue culture are discussed.

–  –  –

Государственное научное учреждение Научно-исследовательский институт садоводства Сибири им. М.А. Лисавенко Россельхозакадемии, Барнаул, 656045, Змеиногорский тракт 49, факс: (7-3852) 68-50-65, тел. (3852) 68-45-75, e-mail: tplaksina@mail.ru В культуре тканей для приготовления рабочих растворов регуляторов роста в качестве растворителей используют щелочи и кислоты, реже диметилсульфоксид (DMSO). Известно, что DMSO обладает способностью проникать через биологические мембраны, увеличивает и усиливает действие некоторых веществ и является мощным антисептиком.

Задача настоящего исследования – оценить влияние разных растворителей регуляторов роста – 0,1 N NaOH и DMSO на морфогенез у одиночных побегов, полученных из корней сеянцев облепихи в результате прямого органогенеза. Регуляторы роста, бензиладенин (ВА) 1,0 мг/л и ИУК 0,5 мг/л, растворенные в щелочи или в DMSO добавляли в питательную среду WPM после автоклавирования. Раствор, где в качестве растворителя использовали щёлочь, стерилизовали с помощью фильтра Millipore с размером пор 0,20µm.

В результате проведенного эксперимента было отмечено 100% образование адвентивных органов (почек и побегов) у эксплантов, где в качестве растворителя использовали DMSO. Ранжирование на группы по количеству адвентивных органов на один эксплант было следующим: 46,2% эксплантов сформировало более 50 адвентивных органов; 30.8% до 15 адвентивных органов и 23% от 15 до 30 адвентивных органов.

На питательной среде, где регуляторы роста были растворены в 0.1 N NaOH, 92,4% экспланта сформировали в основании адвентивные органы. При ранжировании на группы, в каждой группе было одинаковое количество эксплантов и составило 30,8% в каждой.

Полученные результаты могут свидетельствовать об усиление действия регуляторов роста на морфогенез при использовании в качестве растворителя DMSO Исследования выполнены при финансовой поддержке SI (Swedish Institute)

–  –  –

The M.A. Lisavenko Research Institute of Horticulture for Siberia 49, Zmeinogorskiy Tract, Barnaul, 656045, Russia, phone: (011-7-3852) 68-45-75, e-mail: tplaksina@mail.ru A medium where growth regulators were dissolved in DMSO all explants (100%) formed the base clumps of adventitious buds and shoots. At 46.2% of explants formed more than 50 of adventitious buds and shoots per explant and 30.8% of explants formed upto 15 adventitious buds and shoots per explant and 23% of explants formed from 15 to 30 adventitious buds and shoots per explant A medium where growth regulators were dissolved in 0.1N NaOH 92.4% explants formed the base clumps of adventitious buds and shoots. Each group got the same number of explants that formed adventitious buds this on 30.8%.

This issue was supported by Swedish Institute (SI).

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Центральный Сибирский ботанический сад Сибирского отделения РАН, г.Новосибирск, ул. Золотодолинская,101, факс: (383)330-19-86, тел. (383)339-98-29, e-mail: tanita11@mail.ru Allium karataviense Regel., лук каратавский, широко известен как высоко декоративное луковичное растение благодаря парным, широким, сизо-зеленым листьям с фиолетовым оттенком, особенно снизу, и звезчатым, розовато-белым цветкам, собранным в круглые соцветия. Этот вид является редким и эндемичным обитателем горных районов Тянь Шаня и Памира. Высокая стоимость растительного материала, ограничивающая коммерческое использование этого вида, является следствием чрезвычайно низкой скорости размножения и слабым прорастанием семян. Культура in vitro имеет значительный потенциал как метод вегетативного размножение декоративных луковичных растений.

Цель настоящего исследования - проанализировать начальные стадии развития побегов A. karataviense из цветочных бутонов в культуре in vitro.

В качестве эксплантов использовали бутоны цветков на разных стадиях развития.

Стерилизацию проводили с использованием в качестве стерилизующего агента 0,2% раствор хлорида ртути (II) (7 – 9 мин), после многократно промывали в стерильной воде.

Затем бутоны высаживали на среду BDS с добавлением 2 мг/л БАП и 2 мг/л НУК. Для изучения процессов заложения побеговых структур бутоны и экспланты фиксировали в растворе FAA в течение месяца с промежутком в 1-3 дня, а затем готовили постоянные гистологические препараты по методике Паушевой (1986).

На 3-5 день культивирования бутонов на питательной среде отмечали распускание цветков. Морфологические изменения наблюдаемые как разрастание ткани в основании бутонов видны через две недели культивирования, в то время как гистологические срезы показывали клеточные изменения уже через 3 дня после введения в культуру.

Гистологический анализ выявил наличие мелких эпидермальных клеток в месте срастания тычинок и листочков околоцветников, также как и между тычинками и завязью.

К 3 дню эпидермальные клетки подвергались антиклинальным делениям, в то время как эпидермальные клетки листочка околоцветника не принимали участия в этом процессе. В результате этих клеточных делений появились меристематические центры, формирующие бугорки на поверхности цветочных эксплантов. Дальнейшее их развитие привело к появлению примордиев побегов.

Настоящее исследование морфогенеза A. karataviense из цветочных бутонов в культуре in vitro выявило, что новые побеги развиваются из эпидермальных слоев тычиночных нитей в области их срастания с листочками околоцветника.

–  –  –

Federal State Institution of Science Central Siberian Botanical Garden, Siberian Branch RAS, Russia, Novosibirsk, 630090, Zolotodolinskaya st., 101, tel.: (383) 339-98-29, fax: (383)330-19e-mail: tanita11@mail.ru Allium karataviense Regel. is commonly known as a highly ornamental bulbous plant due to the broad, paired, glaucous green leaves tinged with purple, especially beneath, and starshaped, pinkish-white flowers in round inflorescences. This species is a rare and endemic inhabitant of the mountain regions of Tien Shan and Pamirs. The high price of planting material that restricts the commercial use of this species is a consequence of the extremely low multiplication rate and poor seed germination. In vitro cultures have a great potential as a method for vegetative propagation of ornamental bulbous plants.

The aim of the present study was to analyze the initial stages of A. karataviense shoot development from flower buds in vitro culture.

The flower buds at different stages of development were used as a source of explants.

This material was surface sterilized for 7 -9 min with 0.2% mercuric chloride (HgCl2) and rinsed with sterile distilled water 3 times. To induce the shoots the isolated buds were inoculated on the BDS medium, supplemented with 2.0 mg l1 BA (6-benzylaminopurine) and 2.0 mg l1 NAA (-naphthaleneacetic acid). To study the initial stages of organogenesis the buds were fixed in the FAA solution during the month with an interval of 1-3 days. The permanent preparations were made according to standard cytological procedures method of Pausheva (1986).

Flower buds opening were observed at 3-5 days of culture on a nutrient medium.

Morphological changes observed in the tissues proliferation at the base of the buds were visible after two weeks of culture, while histological sections displayed cellular modifications as early as 3 days post culture. The histological analysis revealed the presence of small epidermal cells in the fusion of the stamens and tepals, as well as in the area between the stamens and ovary. By day 3 the epidermal cells of the filament underwent anticlinal divisions, whereas the epidermis of the tepal did not participate in the process. As a result of these cell divisions new meristematic centers appeared forming protuberances on the surface of flower explants. Their further development resulted in appearance of shoot primordia.

The present study of morphogenesis from flower buds of A. karataviense in vitro culture revealed that new shoots developed from the epidermal layers of the filaments in the area of their fusion with the tepals.

Секция 2

ВЛИЯНИЕ ДЛИТЕЛЬНОСТИ ВОЗДЕЙСТВИИ ИМК НА РИЗОГЕНЕЗ

КЛОНОВЫХ ПОДВОЕВ ЯБЛОНИ IN VITRO

Пронина И.Н.

Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт садоводства им. И.В. Мичурина, 393774, г. Мичуринск, ул. Мичурина, 30, факс: (07545) 2-07-61, тел. (07545) 2-07-61, е-mail: invitro82@yandex.ru Первостепенное значение на этапе ризогенеза в условиях in vitro отводится ауксину: типу, концентрации и способу его воздействия на микропобег. Наиболее простым и распространенным способом применения индуктора корнеобразования является введение его непосредственно в среду. Однако длительное воздействие ауксина может стимулировать образование каллуса, который ингибирует процессы ризогенеза.

В связи с этим целью наших исследований явилось изучение влияния длительности воздействия ИМК на ризогенную активность клоновых подвоев яблони.

Для индукции ризогенеза микропобеги подвоев яблони 54-118 и ММ 106 в течение 4, 7 и 10 дней выдерживали на агаризованной питательной среде 1/2МС с ИМК в концентрациях 2,0; 2,5 и 3,0 мг/л, после чего проводили их пересадку на среду свободную от гормонов, контроль – без пересадки. Начало корнеобразования отмечалось уже через 10 дней при 4-х дневном воздействии и всех концентрациях индуктора ризогенеза, а при 7 и 10-дневном – только лишь через 16 дней. Через 4 недели культивирования укореняемость достигала 83-100 %.

Лучшие результаты у подвоя 54-118 как по укореняемости (100 % через 2,5 недели культивирования), так и качеству корневой системы были получены в варианте с концентрацией ИМК 2,0 мг/л и 7-дневном воздействии, а у ММ 106 – при более высокой концентрации. Увеличение длительности содержания микропобегов на среде с ауксином до 10 дней снижало не только укореняемость (на 8,3-33,3 %), но и количество корней (в 1,5-3,1 раза). Постоянное присутствие ауксина в среде (контроль) способствовало каллусообразованию, особенно при высоких концентрациях ИМК, и укореняемость была ниже на 6,4-50,0 %, чем в опытных вариантах. Следует отметить, что при воздействии ИМК в течение 10 дней также наблюдалось каллусообразование, но очень слабое, что вероятно повлияло на некоторое снижение укореняемости подвоев.

Таким образом, анализ полученных результатов свидетельствует о том, что постоянное присутствие ауксина в питательной среде ингибирует корнеобразовательные процессы. Кратковременное воздействие ауксина на микропобеги предпочтительнее в связи с ускорением процесса ризогенеза, увеличением процента укореняемости, слабым каллусообразованием или его отсутствием.

–  –  –

I.V. Michurin Research Institute of Horticulture, Michurin street 30, Michurinsk 393774 Fax: (07545) 2-07-61, phone: (07545) 2-07-61, е-mail: invitro82@yandex.ru Auxin, its type, concentration and effect on microshoot is of prime importance at the rhizogenesis stage in vitro. Introduction of root formation inductor into medium is considered to be the most easy and widespread method of its application. However long-term application of auxin will stimulate callus formation inhibiting rhizogenesis formation.

Therefore our studies were aimed in determination of the effect of IBA duration effect on apple clonal rootstock rhizogenesis activity.

For induction of rhizogenesis apple rootstock 54-118 and MM106 microshoots were maintained on agar medium containing 1/2MC and IBA in concentrations 2,0; 2,5 and 3,0 mg l-1 for 4, 7 and 10 days. Then the transfer followed on medium free of hormones, in control the transfer wasn't used. Shoot formation was observed in 10 days after 4 day exposure to rhizogenesis inductor applied in all concentrations. Shoot formation was revealed in 16 days after 7 and 10 day exposure. Four week cultivation resulted in 83-100 % rooting.

2,0 mg l-1 IBA and 7 day exposure were the most efficient for rootstock 54-118 relatively bothrooting (100 % in 2.5 week cultivation) and root system quality, MM106 rootstock required more high concentration. Increase of duration of microshoot maintaining on agar medium up to 10daus reduced both rooting (by 8,3-33,3 %) and root quantity (in 1,5-3,1 times). Continuous auxine presence in medium (control) promoted callus formation, especially at IBA high concentrations, rooting being 6,4-50,0 % lower compared with experiment treatments. It should be mentioned that 10 day effect of IBA resulted in callus formation, but a very poor one that possibly was responsible for some reduction of rootstock rooting.

Therefore the analysis of the results obtained confirms that continuous presence of auxin in medium inhibits root formation processes. Short-term effect of auxin on microshoots is preferred due to advanced rhizogenesis process, increase of rooting per cent, poor callus formation or its lack.

–  –  –

Государственное научное учреждение Всероссийский НИИ сахарной свеклы им. А.Л.

Мазлумова Россельхозакадемии; 396030, Воронежская область, Рамонский район, п.

ВНИИСС, 86, тел. 8(47340) 5-33-27, e-mail: samani84@mail.ru К настоящему времени установлено, что необходимость получения высокопродуктивных, устойчивых к биотическим и абиотическим факторам сортов и гибридов гороха требует использования современных методов биотехнологии, ускоряющих селекционный процесс и повышающих его эффективность. В процессе селекции отбор и сохранение ценных исходных и полученных форм затрудняется.

Нередко гибель зародышей возникает на ранних стадиях развития. Поэтому трудности получения необходимых признаков затягивают всю селекционную работу.

С целью повышения результативности селекционных работ для размножения ценных селекционных номеров в настоящее время разрабатываются методы на основе культуры изолированных тканей. Биотехнологические методы дают возможность получать и сохранять генетически однородный материал и проводить направленные отборы.

Наши исследования были направлены на поиск оптимальных условий культивирования регенерантов гороха в культуре тканей. Исходным материалом для исследований служили сорта и линии гороха селекции ВНИИСС.

Анализ литературных источников показал, что для проведения биотехнологических исследований на горохе в качестве эксплантов для получения регенерантов использовали верхушки стеблей, междоузлия, корни и листовые пластинки.

Для этого в опытах были исследованы питательные среды с большим содержанием гормонов.

Однако использование в качестве эксплантов различных частей асептических проростков гороха – апикальная часть стебля, часть стебля с пазушной почкой, и их расположение на питательной среде (вертикальное или горизонтальное) позволило получить интересные данные.

В ходе исследований было отмечено, что при культивировании верхушечных частей растения в горизонтальном положении на питательных средах с умеренным гормональным фоном (БАП 0,5 + ИМК / ИУК 0,1) коэффициент размножения равнялся 2.

Изучение повышенных концентраций гормонов положительных результатов не дало. Вертикальное расположение проростков (частичное погружение) на питательной среде с БАП 0,5 + ИМК 0,1 дало возможность повысить выход микроклонов до 3 штук с одного введенного экспланта и до 4 штук при повышенной гормональной нагрузке среды (БАП 5,0 + НУК 0,2).

Активный рост и развитие эксплантов был замечен на стебле с пазушной почкой, помещенных горизонтально на поверхность питательной среды (БАП 5,0 + НУК 0,2).

Коэффициент размножения на данном варианте среды равнялся 5, в то время как на среде с БАП 0,5 + ИМК 0,1 не превышал 2.

Культивирование частей стебля с пазушной почкой вертикально на среде не привело к повышению коэффициента размножения. На средах с повышенной гормональной нагрузкой отмечалось оводнение тканей, но гибели экспланта не наблюдалось. Коэффициент размножения был на уровне 2 регенерантов с одного введенного.

Таким образом, микроразмножение гороха можно вести на средах с различной гормональной нагрузкой, при этом необходимо учитывать положение эксплантов на среде.

Для повышенных концентраций (БАП 5,0 + НУК 0,2) оптимальным является горизонтальное положение, для умеренной (БАП 0,5 + ИМК 0,1) – вертикальное.

Секция 2

–  –  –

State Scientific Institution All-Russian Research Institute of Sugar Beet. A.L.Mazlumov Agricultural 396030, Voronezh Region, Ramon Rayon, VNIISS, 86, tel. 8 (47340) 5-33-27, e-mail: samani84@mail.ru It has been established that the need for highly resistant to biotic and abiotic factors of varieties and hybrids of peas requires the use of modern biotechnology methods that accelerate the breeding process and improve its effectiveness. In the process of selection and breeding conservation of valuable input and derived forms is difficult. Often the death of the embryo occurs in the early stages of development. Therefore, the difficulty of obtaining the necessary evidence tighten all breeding work.

In order to improve the efficiency of selection works for breeding stock selection numbers are being developed methods based on the culture of isolated tissues. Biotechnological methods enable us to obtain and maintain genetically homogeneous material and conduct directed selection.

Our research has focused on the search for optimal culture conditions of regenerated pea in tissue culture. The starting material for research were varieties and breeding lines of pea VNIISS.

Analysis of the literature showed that for biotechnology research on peas as explants for regenerants used tops of stems, internodes, roots and leaf blades. To do this, experiments were investigated nutrient media containing large amounts of hormones.

However, the use as explants of different parts aseptic pea seedlings - apical part of the stem, part of the stem with axillary bud, and their location in a nutrient medium (vertical or horizontal) yielded interesting data.

During the study it was observed that the cultivation of the apical parts of the plant in a horizontal position on nutrient media with moderate hormonal (BAP 0.5 + IMC / IAA 0.1) the multiplication factor is 2.

The study of higher concentrations of hormones positive results were achieved. The vertical arrangement of seedlings (partial immersion) on medium with BAP 0.5 + 0.1 ISB helped to improve output mikroklonov to 3 pieces with a single administration of explant and up to 4 load at elevated hormonal environment (BAP 5.0 + NAA 0 2).

Active growth and development of the explants was observed on the stem with axillary bud, placed horizontally on the surface of the culture medium (BAP 5.0 + NAA 0.2).

Multiplication factor for this variant environment was 5, while in the medium with BAP 0.5 +

0.1 IMC does not exceed 2.

Cultivation parts of the stem with axillary bud vertically on the medium did not increase the multiplication factor. On media with increased hormonal stress observed hydration of tissues, but the death of explants was observed. Multiplication factor was at 2 regenerants from one entered.

Thus, micropropagation peas can lead to media with different hormone load, it should recognize the position of the explants on medium. For higher concentrations (BAP 5.0 + NAA 0.2) is optimal horizontal position, to moderate (BAP 0.5 + IBA 0.1) - vertical.

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева РАН, Москва, 127276, ул. Ботаническая, 35, факс: (495)9778018, тел. (499)2318329, e-mail: morphogenesis@mail.ru В культуре клеток моркови развитие соматических зародышей из одиночных клеток сопряжено с формированием проэмбриогенных клеточных масс ( ПЭМ ), которые представляют собой небольшие клеточные агрегаты. Стимуляция их дальнейшего развития в соматические зародыши осуществляется удалением гормона из среды.

В качестве ПЭМ в работе использовали клеточную фракцию 100-38мкм, выделенную из 10 суточной эмбриогенной культуры, поддерживаемой на среде, содержащей 0,2мг/л 2,4D, и суспензионную культуру, которую получали после культивирования фракции 100-38мкм на среде без гормона в течение 2 суток. Фиксацию материала проводили по методу Хеплера в присутствии экзогенного кальция и последующей обработки феррицианидом калия, что позволяет получить селективное контрастирование внутриклеточных мембран. Для выявления полисахаридных и гликопротеидных включений клеточных стенок использовали конканавалин А.

Фракция 100-38мкм представлена одиночными клетками и клеточными агрегатами, состоящими из одних меристематических клеток. Кроме того встречаются агрегаты, в которых наряду с единичными меристематическими клетками обнаруживаются сильно вакуолизированные и мертвые клетки. Электронномикроскопический анализ проводили на клеточных агрегатах, поскольку в используемых нами условиях регенерации соматических зародышей из одиночных клеток не происходит.

Цитоплазма меристематических клеток, образующих агрегаты, насыщена свободными рибосомами. Плазмалемма клеток без инвагинаций с редко встречающимися плазмалеммасомами. Короткие ретикулярные тяжи имеют неравномерное распределение рибосом и немногочисленны. Цистерны диктиосом собраны в стопки по 3-4 и окружены везикулами. Структура митохондрий хорошо развита. Отмечается гетерогенность клеток по наполненности пластид крахмалом. Сильно вакуолизированные клетки, встречающиеся в составе агрегатов, характеризуются более скудной ультраструктурой.

Культивирование фракции 100-38мкм на среде без гормона в течение двух суток приводит к изменениям ультраструктуры клеточных агрегатов. В первую очередь отмечается повышение электронной плотности клеточных стенок и появление электронно-плотного материала фибриллярной структуры на поверхности наружных клеток агрегатов и в межклетниках. Кроме того, наблюдается увеличение извилистости плазматической мембраны, а также появление многочисленных везикул как в периплазматическом пространстве, так и цитоплазме вблизи плазмалеммы. Развитая система эндоплазматического ретикулюма и диктиосом активно формируют везикулярные структуры. Появление мультивезикулярных тел как в цитоплазме, так и в вакуолях, свидетельствуют об активации экзо- и эндоцитоза.

–  –  –

Timiryazev Institute of Plant Physiology, Russian Academy of Sciences, Botanicheskaya ul.35,

Moscow, 123276 Russia, fax: 7(495)9778018, tel. (499)2318329, e-mail:

morphogenesis@mail.ru Intensive work has been conducted in defining the course of carrot somatic embryo development in vitro. Using the single cells as a source of somatic embryos, it was shown that proembriogenic cell masses i.e. small size cell clusters, could be considered as earliest development stage of carrot somatic embryos.

Our investigation was carried out on carrot embryogenic culture grown on the medium containing 0.2 mg/l 2.4D. Size-fractionation technique was applied for obtaining cell fraction 100- -day embryogenic culture. This fraction was cultivated for 2-day on hormone free medium to induce further development proembriogenic cell masses into somatic embryos. The Hepler fixation with the Ca supplement and following ferricyanide treatment increased the intracellular membrane contrast and made them visible. Concavalin A was applied to visualize the polysaccharide and glycoprotein inclusions in cell walls.

The 100- olated cells and cell aggregates composed of meristem cells only. We also found the aggregates containing both meristem cells with dense cytoplasm and vacuolated cells as well as dead cells localized on the surface or/and inside. We used only the cell aggregates for EM analysis, because the regeneration of somatic embryos from the isolated cells at our experimental conditions did not occure.

The cytoplasm of meristem cells contained the high concentration of free ribosomes, short granular ER tubes, stacks of 3 – 4 dictiosome cisternae, surrounded by Goldgi vesicles, and well developed mitochondrion in our experiments. Starch grains in plastids varied in size.

We observed no plasmalemma’s invaginations and few plasmalemmasomes in the meristem cells. The vacuolated meristem cells had less developed membrane structures.

When the 100-38 mµ cell fraction was grown in the medium without the hormone for 2 days the electron density of the cell walls, both the plasmalemma undulations and the concentration of vesicles in the peripheral cytoplasm and in periplasmic space increased. We observed the fibrous electron-dense material on the surface of outer cells and in the intercellular space of cell aggregates. Appearance of numerous multivesicular bodies and vesicles in cytoplasm and in vacuoles evidenced the activation of eхo and endocytosis.

–  –  –

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Алтайский государственный университет», Барнаул, 656049, пр. Ленина, 61, 8-905-984-22-92, e-mail: L-tichomirova@yandex.ru Успешная разработка биотехнологии любой культуры не возможна без знания морфогенеза объекта исследования. Для этого необходимо изучение не только морфогенеза интактных растений, но и закономерностей формообразования у растенийрегенерантов в культуре in vitro.

В биологии понятие онтогенеза традиционно подразумевает развитие индивидуального организма, в то время как понятие морфогенеза относится к образованию и дифференциации органов и тканей.

Цель работы – на основании морфологического и гистологического анализа изучить особенности морфогенез у гибридов I. ensata в культуре ткани на этапе собственно микроразмножения.

Объекты исследований – гибриды I. ensata селекции НИИСС им. М.А. Лисавенко.

Экспериментальные работы с использованием метода культуры тканей и гистологический анализ проведены по общепринятым методикам.

Для микроразмножения I. ensata готовили питательные среды на основе MS, содержащие 10, 15, 17.5, 20.0 мкМ БАП. На контрольной питательной среде (1,0 мкМ БАП) растения I. ensata гибрид 59-66-00 имели высоту 46,7 мм, что на 10,0 мм меньше среднего значения в пределах опыта. Среднее значение коэффициента размножения составляло 1,17. На анатомических срезах чётко просматривались все системы тканей.

Отмечали геммо- и ризогенез.

На питательной среде, содержащей 10,0 мкМ БАП, побегообразовательная деятельность I. ensata была выражена в средней степени. Среднее значения коэффициента размножения у гибрида 59-66-00 было равно 1,55. При анатомическом исследовании на поперечном срезе просматривались все системы тканей. Адвентивные побеги формировались в центральном цилиндре у проводящих пучков материнского растения.

Использование высоких концентраций цитокинина (17,5-20,0 мкМ БАП) приводило к изменению морфологии у побегов I. ensata, вызывало их уродливость.

Гистологический анализ выявил значительные изменения и в тканях корневищ. Основную площадь в сечении корневища занимал центральный цилиндр с гипертрофированной проводящей тканью. Вероятно, под влиянием токсического действия высоких концентраций гормонов происходило патологическое разрастание трахеальных элементов вокруг проводящих пучков, приводящее к угнетению последних и гибели клеток паренхимы центрального цилиндра. Первичная кора на сечении корневища у таких побегов была представлена в виде тонкого рыхлого слоя клеток.

–  –  –

Altai State University. 656049 Russia Barnaul 61 Lenina ave. 8-905-984-22-92, L-tichomirova@yandex.ru Successful development of biotechnology of any crop is impossible without knowledge of morphogenesis of investigation object. For this purpose, it is necessary to study not only morphogenesis of intact plants, but formation process of plants-regenerators in culture in vitro as well.

In biology the term ontogenesis traditionally means the development of individual organism, at the same time the term morphogenesis refers to formation and differentiation of organs and tissues.

The aim of the given work is on the base of morphological and histological analysis to study peculiarities of morphogenesis of hybrids I. ensata in tissue culture at the stage of private micro-propagation.

Investigation objects are hybrids I. ensata of M.A. Lisavenko RIHS breeding.

Experimental works with the application of tissue culture method and histological analysis have been performed according to generally accepted methods.

For micro-propagation of I. ensata we prepared nutritional media on the base of MS, containing 10, 15, 17.5, 200 mkM BAP. In control nutritional medium (1.0 mkM BAP) of I.

ensata, hybrids 59-66-00 had the height 46.7 mm, that on 10.00 mm less than the average meaning in experiment. The average meaning of propagation coefficient was 1.17. All the tissue systems were looked through well in anatomic cuts. Hemmo-and rizogenesis were noticed.

In nutritional medium, containing 10.0 mkM BAP, shoot forming activity of I.ensata was expressed to the average degree. The average meaning of propagation coefficient of hybrid 59-66-00 was equal to 1.55. All the tissue systems were looked through on cross cut in anatomic investigation. Adventitious shoots were formed in a central cylinder of conducting bundles of a maternal plant.

Application of high cytokinin concentrations (17.5-20.0 mkM BAP) changed morphology of shoots of I. ensata and caused their ugliness. Histological analysis found out significant changes in tissue roots as well. Central cylinder with hypertrophic conducting tissue occupied the main area in a root section. Probably, under the influence of toxic action of high hormone concentrations, pathogenic spreading of tracheal elements around conducting bundles took place, leading to oppression of the last ones and death of parenchyma cells of a central cylinder. Primary bark in a root section of such shoots was represented as a thin loose layer of cells.

Секция 2

ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИАЛЬНОГО ЛИПОПОЛИСАХАРИДА НА

МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ КАЛЛУСНЫХ КЛЕТОК ПШЕНИЦЫ IN

VITRO Ткаченко О.В.1, Евсеева Н.В.2, Спивак В.А.3, Матора Л.Ю.2, Бурыгин Г.Л.2, Лобачев Ю.В.1, Щеголев С.Ю.2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова, Саратов, 410012, Театральная пл.

1, факс: (8452)26-27-83, тел.:

(8452)23-46-97, e-mail: oktkachenko@yandex.ru Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии растений и микроорганизмов РАН, Саратов, 410049, пр. Энтузиастов, 13, факс: (8452) 970444, тел.: (8452)970474; e-mail: evseeva@ibppm.sgu.ru Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Национальный исследовательский Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского, Саратов, 410012, ул.

Астраханская, 83, факс: (8452)210644, тел.: (8452)210636; e-mail: spivac_VA@mail.ru Исследовали изменение морфогенетических показателей соматических каллусов яровой пшеницы (Triticum aestivum L.) в культуре in vitro под влиянием липополисахаридов (ЛПС) ассоциативных рост-стимулирующих бактерий штамма Azospirillum brasilense Sp245.

Использовали генетическую модель, включающую две почти изогенные линии пшеницы сорта Саратовская 29, альтернативные по гену короткостебельности RhtB1c и контрастные по эмбриогенной способности. В стандартную среду Линсмайера-Скуга с содержанием 2,4Д 2 мг/л вводили 10 мкг/мл ЛПС, выделенного из наружной мембраны бактерий. Полученные каллусы и растения-регенеранты анализировали с использованием морфометрического и морфоанатомического анализов.

Ранее было установлено, что короткостебельная почти изогенная линия пшеницы с геном Rht-B1c обладает более высоким морфогенным потенциалом в культуре соматических тканей in vitro по сравнению с ее высокорослым сестринским сибом, несущим аллель дикого типа Rht-B1a. Морфоанатомический анализ подтвердил установленный положительный эффект гена RhtB1c на всех этапах культивирования тканей in vitro.

Введение в состав среды ЛПС в целом повышало активность морфогенетических процессов. Особенно заметно было повышение выхода каллусов с очагами меристематической активности у высокорослой линии в присутствии в питательной среде ЛПС 10 мкг/мл.

Следовательно, морфогенный потенциал каллусов исследуемых линий выравнивался.

Было показано, что ЛПС стимулировал процесс вторичной дифференциации клеток каллуса и формирование очагов морфогенеза уже на 7 сутки культивирования зародышей независимо от генотипа. Меристематическая активность, в основном, наблюдалась в зоне надальной пластинки, проводящих пучков щитка и колеоптиля.

Таким образом, установлено, что ЛПС ассоциативных бактерий A. brasilense Sp245 стимулирует процессы вторичной дифференциации и регенерационную способность каллусных клеток пшеницы, повышая тем самым эффективность культивирования генотипов с низким эмбриогенным потенциалом. Наибольшей физиологической активностью в отношении каллусных клеток обладает концентрация ЛПС в питательной среде 10 мкг/мл.

Полученные результаты способствуют более глубокому пониманию механизмов морфогенеза в культуре тканей и могут быть использованы для повышения эмбриогенного потенциала растительных объектов, в частности пшеницы, в культуре in vitro.

Секция 2

INFLUENCE OF BACTERIAL LIPOPOLISAKHARID ON MORPHOGENETIC

POTENTIAL OF WHEAT CALLUS CELLS IN VITRO

Tkachenko O.V. 1, Evseeva N.V. 2, Spivak V.A. 3, Matora L.Yu. 2, Burygin G.L. 2, Lobachev Yu.V. 1, Shchyogolev S.Yu. 2 Vavilov Saratov State Agrarian University, 1 Teatralnaya Ploshchad, Saratov 410012, Russia.

Fax: +7(8452)26-27-83, tel.: +7(8452)23-46-97; e-mail: oktkachenko@yandex.ru, Institute of Biochemistry and Physiology of Plants and Microorganisms, Russian Academy of

Sciences, 13 Prospekt Entuziastov, Saratov 410049, Russia. Fax: +7(8452) 970444, tel.:

+7(8452) 970474; e-mail: evseeva@ibppm.sgu.ru,

Chernyshevsky Saratov State University, 83 Ul. Astrakhanskaya, Saratov 410012, Russia. Fax:

+7(8452)210644, tel.: +7(8452)210636; e-mail: spivac_VA@mail.ru Change of morphogenetic indicators of somatic calli of spring wheat (Triticum aestivum L.) in culture in vitro under the influence of lipopolysaccharides (LPS) of associative growthpromoting bacteria of Azospirillum brasilense Sp245 strain were studied. Genetic model including two near-isogenic lines of wheat cv. Saratovskaya 29 that differed in the shortstemmed RhtB1c gene and had contrasting embryogenic capacity was used. 10 mkg/ ml of LPS isolated from the bacterial outer membrane was injected to standard medium of LinsmaierSkoog containing 2 mg/ l of 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid ). The resultant calli and regenerated plants were analyzed by morphometric and morphological-anatomical analysis.

It was indicated before that the short-stemmed near-isogenic line of wheat with RhtB1c gene has higher morphogenic potential in culture of somatic tissues in vitro in comparison with its tall sister line having allelic RhtB1a gene of wild type. Morphological-anatomical analysis confirmed the positive effect of the RhtB1c gene at all stages of tissue culturing in vitro.

On the whole, the addition of LPS to the medium increased the activity of morphogenetic processes. The increase in the yield of calli with meristematic activity loci in the tall line in the presence of 10 mkg/ ml of LPS in the nutrient medium was especially noticeable.

Consequently, the morphogenic potential of the calli of the lines under study leveled off.

LPS was found to promote the secondary differentiation of callus cells and the formation of morphogenesis loci as early as on day 7 of embryo culturing, regardless of the genotype.

Meristematic activity was observed mostly in the nodal plate, vascular bundles of the scutellum, and coleoptile of the embryos.

Thus, on the basis of the obtained data, it has been established that the LPS of the associative bacterium A. brasilense Sp245 promotes the secondary differentiation and the regeneration capacity of wheat callus cells, thereby improving the effectiveness of culturing of genotypes with low embryogenic potential. A nutrient-medium concentration of LPS of 10 kg/ml has the greatest physiological activity toward callus cells.

The obtained results make it possible to understand deeper the mechanisms of morphogenesis in tissue culture and can be used to increase the embryogenic potential of plant objects, specifically wheat, in culture in vitro.

–  –  –

Учреждение российской академии наук. Институт леса им. В.Н. Сукачева СО РАН,

Красноярск. 660036, Красноярск, Академгородок 50, стр. 28. Тел: (391)249-46-25; Факс:

(391)243-36-86; culture@ksc.krasn.ru Незрелые зиготические зародыши и мегагаметофиты, Larix sibirica, Larix sukaczewii, Larix gmelinii, Pinus sibirica, Pinus pumila и Picea ajaiensiss культивировали на средах АИ ( патент № 2456344) и LV, дополненных глютамином, гидролизат казеином, аскорбиновой кислотой и гормонами ( 2.4Д и 6-БАП). Образовавшаяся эмбриональносуспензорная масса эктивно пролиферировала на этих средах с уменьшенныи содержанием цитокининов. Соматические зародыши вызревали на базальных средах с АБА (60-120 mM и ПЭГ). Прорастание соматических зародышей происходило на средах АИ и LV свободных от гормонов.

Несмотря на видовую специфику хвойных, эмбриональные процессы проходили одинаково: наблюдалось растяжение соматических клеток и их асимметричное деление с образованием инициалей и клеток-трубок ( культура зародышей) или образование ценоцита смещения ядре и образование инициалей ( культура мегагаметофитов). Затем клетки-инициалей последовательно делились и формировали мелкие эмбриональные клетки (эмбриональные глобулы). На одном из концов эмбриональных глобул развивались суспензороподобные структуры. Соматические зародыши вызревали при добавлении в среду АБК и ПЕГ. Длительно прлиферирующие клеточные лшинии были получены у Larix sibirica, L. sukaczewii, Pinus pumila. Эмбриогенные линии различались по пролиферативной активности. Эти линии продуцировали 400-800 штук соматических зародышей на 1г. свежего веса каллуса. Уменьшения пролиферативной активности за три более лет культивирования не наблюдалось. Соматический эмбриогенез проходил под строгим генетическим контролем. Эмбриогенные клеточные линии и соматические зародыши были продуцированы только от деревьев- доноров с высоким репродуктивным потенциалом.

Исследования были проведены в рамках выполнения работ по гранту РФФИ № 11

–  –  –

EMBRYOGENIC CELL LINES AND SOMATIC EMBRYOGENESIS IN VITRO

OF COMIFEROUS SPECIES GROWING IN SIBERIA

Tretiakova I.N., Voroshilova E.V., Ivanitskya A.S., Park M.E., Shuvaev D.N.

Institete of Forest Siberian Branch RAS, 660041, Krasnoyarsk, Akademgorodok 50, 28.Tel:

(391)249-46-25; fax: (391)243-36-86; E-mail: culture@ksc.krasn.ru Immature isolated embryos and megagamethophytes of Larix sibirica, Larix sukaczewii, Larix gmelinii, Pinus sibirica, Pinus pumila and Picea ajaiensiss were experimentally cultured on LV modified and AI (patent №2456344) media added by L-glutamine, casein hydrolysate, ascorbic acid, and hormones (2,4-D and BA). The embryonal suspensornal mass exhibited active proliferation on these media under a reduced concentration of cytokinins. The somatic embryos matured on the basal media with ABA (60-120 mM) and PEG. The germination of somatic embryos occurred on hormon-free AI and LV medium.

Notwithstanding the differences between the conifer species of interest, the embryological processes went the same way: elongation of somatic cells and their asymmetric division with formation of initial and tube cells (embryo culture) and formation of coenocytes, nucleus migrate and initial formation (culture megagamethophytes). Then embryo initial cells experienced sequential divisions and formed small embryonal cells (embryonic globules).

Suspensor-like structures were developed from the edges of embryonic globules. Somatic embryos matured after addition of ABA and PEG into the media. L,ong-term proliferating cell lines and plantlets were obtained in, Larix sibirica, Larix sukaczewii Pinus pumila. The embryogenic lines differed in proliferative activity. These lines produced 400-800 somatic embryos per 1g of callus fresh weight. No proliferation activity decrease was observed over the three year period of culturing. Embryogenic cell lines and somatic embryos were produced only from the donor tree genotypes having high reproductive potential.

This work was supported by RFBR grants № 11-04-00281

–  –  –

Учреждение Российской академии наук Институт леса им. В. Н. Сукачева Сибирского отделения РАН, Красноярск, 660036, Академгородок №50, стр. 28, факс: (391) 243-36-86, тел. (391) 249-44-47, e-mail: denis.shuvaev@gmail.com Кедровый стланик относится к роду пятихвойных сосен и произрастает на северовостоке России, занимая обширный ареал от северного Прибайкалья до полуострова Камчатка.

Данный вид имеет большое экологическое и хозяйственное значение. Вместе с тем, огромные массивы зарослей стланика уничтожаются пожарами, а также нерациональной хозяйственной деятельностью человека. В связи с тем, что кедровый стланик медленно растет, его восстановление затягивается на 30-40 лет.

Метод регенерации кедрового стланика через соматический эмбриогенез дает возможность в малые сроки получать достаточное количество посадочного материала. Однако для культуры тканей растений характерны процессы, объединяемые термином сомаклональная изменчивость. Основными причинами данной изменчивости являются различные нарушения генетического материала. Эти нарушения могут быть вызваны различными патологиями митоза. Патологический митоз – один из способов возникновения мутаций и развития анеуплоидии, что в свою очередь способно влиять на качественный и количественный состав регенерантов стланика.

В 2011 году было получено 7 эмбриогенных клеточных линий (ЭКЛ) кедрового стланика, из которых 4 сохраняли длительную пролиферативную активность (3 года) на питательной среде 1/2LV2. Данные 4 ЭКЛ получили следующие обозначения: 21.11; 21.12; 21.4 и 22.9. ЭКЛ отличались по количеству соматических зародышей, продуцируемых на грамм эмбрионально-суспензорной массы (ЭСМ), а также по способности продуцировать зрелые соматические зародыши. ЭКЛ 21.11 и 21.12 продуцировали соматические зародыши в количестве 1055 и 1080 на грамм ЭСМ, соответственно. Из ЭСМ клеточной линии 21.11 было получено 36 зрелых соматических зародышей – из ЭСМ линии 21.12 – 63. Эмбриогенная клеточная линия 21.4 продуцировала соматические зародыши в количестве 1320 на грамм ЭСМ. Однако, из ЭСМ данной клеточной линии на стадии вызревания было получено всего 3 зрелых соматических зародыша. Эмбрионально-суспензорная масса клеточной линии 22.9 утратила способность продуцировать соматические зародыши и состояла в основном из каллусных клеток. Митотический индекс и процент патологических митозов в ЭСМ клеточной линии 21.11 составили 1,1% и 8,1%, соответственно. Для клеточной линии 21.12 митотический индекс составил 1,5%, процент патологических митозов – 1,6%. Среди форм патологий митоза были отмечены: отставание и фрагментация хромосом в метафазе, набухание и слипание хромосом. ЭСМ клеточной линии 21.4 характеризовалась наибольшим процентом патологических митозов – 20,5%, митотический индекс составил 1,6%. В ЭСМ данной клеточной линии встречалось множество различных патологий митоза, например, отставание хромосом в анафазе, хромосомные мосты, асимметричный митоз и др. Для ЭКЛ 22.9 митотический индекс составил 2,2% – процент патологических митозов – 8,2%.

Таким образом, эмбриогенные клеточные линии кедрового стланика показали вариабельность по способности продуцировать соматические зародыши. На фоне имеющихся данных по проценту патологических митозов можно сделать предположение, что способность клеточных линий продуцировать зрелые соматические зародыши зависела от аномалий клеточного деления, которые могут происходить в течение эмбриогенеза.

–  –  –

Forest Institute, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Krasnoyarsk, 660036, Akademgorodok №50, building 28, fax: (391) 243-36-86, phone number: (391) 249-44-47, email: denis.shuvaev@gmail.com Pinus pumila grows on the north-east Russia and one covers area from the northern Baikal region to the pen. Kamchatka. This species plays important ecological role and economical one. At the same time, the huge areas of Pinus pumila are destroyed with the fires and irrational economical activity of human. In regard with that that Pinus pumila is characterized slow growth; its restoration is delayed on 30-40 years.

Regeneration of Pinus pumila by somatic embryogenesis enables to obtain the sufficient quantity plantlets in short time. However, it is known of the phenomenon' existence which was named somaclonal variation. The main reasons of this variation are different disturbances of the genetic material. These disturbances can be result of the pathological mitosis. Pathological mitosis is one of ways appearing of mutations and aneuploidy. These phenomena are able to affect on the produce of the plantlets.

In 2011, it was initiated seven embryogenic cell lines (ECL) of Pinus pumila. The four from them kept the long proliferated activity (three years) on a nutrient medium 1/2LV2. These four ECL were labelled as 21.11; 21.12; 21.4 и 22.9. ECL differed by the quantity of somatic embryos produced per one gram embryonal-suspensor masses (ESM), as well as the ability to produce mature somatic embryos. ECL 21.11 and 21.12 produced the somatic embryos in an amount 1055 and 1080 per gram of ESM, accordingly. From ESM of the cell line 21.11 was obtained 36 the mature somatic embryos – from ESM of the cell line 21.12 was 63.

Embryogenic cell line 21.4 produced the somatic embryos in an amount 1320 per gram ESM.

However, it was obtained only 3 the mature somatic embryos. ESM of cell line 22.9 lost the ability to produce the somatic embryos. This cell line consisted of the calli cells. The mitotic index (MI) and the percent of pathological mitosis in ESM of cell line 21.11 were 1.1% and 8.1%, accordingly. For cell line 21.12, MI was 1.5% and the percent of pathological mitosis was 1.6%. It were registered such pathologies of mitosis as lagging and fragmentation of chromosomes, their swelling and clumping. ESM of cell line 21.4 was characterized with the biggest percent of pathological mitosis which was 20.5%. The mitotic index was 1.6%. In ESM this cell line was observed a lot of pathological mitosis, for instance, lagging of chromosomes in anaphase, chromosome bridges, asymmetrical mitosis et al. For ECL 22.9, MI was 2.2% and the percent pathological mitosis was 8.2%.

Thus, the embryogenic cell lines of Pinus pumila showed the variation related with the ability to produce the somatic embryos. Taking into account the results about the percent of pathological mitosis it can be assumed that the ability of the cell lines to produce the mature somatic embryos depended on the pathologies of cell division, which can occur during embryogenesis.

–  –  –



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 9 |

Похожие работы:

«Экологическое общество "Зеленое спасение" Республика Казахстан, Алматы, 2008 К Третьему совещанию сторон Орхусской конвенции For the Third Meeting of the Parties to the Aarhus Convention The Ecological Society Green Salvation The Republic of Kazakhstan, Almaty, 2008 ББК 20.1 К 11 Электронные ве...»

«Рабочая программа дисциплины (модуля) Практикум по фитобиотехнологии 1. Код и наименование дисциплины (модуля) В.М2.ОД.3.2. Уровень высшего образования: магистратура.3. Направление подготовки: 06.04.01 Биолог...»

«Песков В.Н., Тарасенко М.О., Франчук М.В. 82 Изменчивость линейных размеров. птенцов обыкновенного жулана УДК 598.292:591.3 ИЗМЕНЧИВОСТЬ ЛИНЕЙНЫХ РАЗМЕРОВ, ПРОПОРЦИЙ ТЕЛА И ПЕРИОДИЗАЦИЯ РАЗВИТИЯ ПТЕНЦОВ ОБЫКНОВЕННОГО ЖУЛАНА LANIUS COLLURIO COLLURIO L. В.Н. Песков1, М.О. Тарасенко2, М.В. Франчук1 1...»

«www.modern-j.ru _ УДК 338.484 Абдраманова Г.К.,кандидат экономических наук Доцент Евразийский Национальный Университет имени Л.Н.Гумелева Казахстан, Астана Токтасынова Ж.Н., бакалавр Студентка Евразийский Национальный Университет имени Л.Н.Гумелева Казахстан, Астана "ЗЕЛЕНЫЙ КЛЮЧ" ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЗНАК КАЧЕСТВА ДЛЯ ОТЕ...»

«ПОЛИТБЮРО 2.0: реновация вместо демонтажа Август 2017 Перечень докладов о Политбюро 2.0 21.08.2012 Большое правительство Владимира Путина и "Политбюро 2.0" 21.01.2013 Политбюро 2.0 накануне перезагрузки элитных групп 22.05.2013 Год Правительства Дмитрия Медведева: и...»

«3.2016 СОДЕРЖАНИЕ CONTENTS AGROECOLOGY АГРОЭКОЛОГИЯ Красноперова Е. А., Юлдашбаев Ю. А., Гала Krasnoperova E. A., Yuldashbaev Yu. A., Galatov A. N. тов А. Н. Методологические аспекты экологиза Methodological aspects of agrarian production eco ции аграрного производства РАСТЕНИЕВОДСТВО PLANT RAISING Кибальник О. П...»

«Экосистемы. 2016. Вып. 6. С. 100–106 СЕЛЕКЦИЯ И ДЕКОРАТИВНОЕ РАСТЕНИЕВОДСТВО УДК: 582.973:631.526.32 ХОЗЯЙСТВЕННО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДЕКОРАТИВНЫХ СОРТОВ И ФОРМ ЖИМОЛОСТИ (LONICERA L.) В РОССИИ Сорокопудов В. Н.1, Куклина А. Г....»

«ПОЯСНИТЕЛЬНАЯ ЗАПИСКА Учебная ознакомительная практика студентов II курса, специализирующихся на кафедре молекулярной биологии, является составной частью учебного процесса и направлена на подготовку квалифицированных специалистов в области молекулярной биологии. Целью учебной ознакомительной практи...»

«ШИРОКОВА Анна Вячеславовна ИЗМЕНЕНИЕ ВОДНОГО И ИОННОГО БАЛАНСА КЛЕТОК U937 ПРИ АПОПТОЗЕ, ВЫЗВАННОМ ЭТОПОЗИДОМ И СТАУРОСПОРИНОМ 03.00.25 Гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учено...»

«ООО "ИНСТИТУТ РЕСТАВРАЦИИ, ЭКОЛОГИИ и ГРАДОСТРОИТЕЛЬНОГО ПРОЕКТИРОВАНИЯ" Муниципальный заказчик: Комитет архитектуры и градостроительства администрации городского округа "Город Калининград". ДОКУМЕНТАЦИЯ ПО ПЛАНИРОВКЕ ТЕРРИТОРИИ Проект планировки с проектом межевания в его составе территории в границ...»

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13) RU 2 574 496 C1 (51) МПК G08G 1/01 (2006.01) ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ (12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ПАТЕНТУ 2014127098/11, 03.07.2014 (21)(22) Заявка: (72) Автор(ы): Давыдов Юрий Львович (RU), (24) Дата начала отсчета срока действия патента: Шемигон Николай Николаевич (RU), 03.07.201...»

«Известия высших учебных заведений. Поволжский регион УДК 592.173 В. О. Козьминых ЖУЖЕЛИЦА СИБИРСКАЯ CARABUS SIBIRICUS F.-W. (COLEOPTERA, CARABIDAE) – ОХРАНЯЕМЫЙ ВИД ЖЕСТКОКРЫЛЫХ НАСЕКОМЫХ ПОВОЛЖЬЯ И УРАЛА1 Аннотация. Приведены данные о распространении, таксономической структуре популяций и биологии охраняемого вид...»

«ООО "РЗА СИСТЕМЗ" г. Москва Щиты оперативного постоянного тока серии ШОТ1М с ограниченными функциональными характеристиками РУКОВОДСТВО ПО ЭКСПЛУАТАЦИИ ЕАБР.656574.003-01 РЭ 2012 г. Наименование Редакция Дата 03.10.11 г. Версия №0 Оригинально...»

«03.06.01 Физика и астрономия Направления № Научное направление Коды по ГРНТИ научноисследовательс 29.35; 29.37; 29.19; Физика кой 29.33; 29.19 деятельности Университет, позиционируя себя на российском и Стратегия научномеждународном научно-образовательном пространстве исследовательс как центр образования,...»

«Муравьёв А.Г., Мельник А.А.ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ПРАКТИКУМ Программа элективного курса для учащихся 9–11 классов ЗАО "Крисмас+" Санкт-Петербург ББК 74.264.4+74.264.5+74.265.7 УДК 373.5+ 372.854+372.857 + 372.853+ 372.857+ 372.862+ 658.382 Экологический практикум: Программа элективного курса для шко...»

«МЕЖДУНАРОДНАЯ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ "УРАЛЬСКАЯ ГОРНАЯ ШКОЛА – РЕГИОНАМ" 8-9 апреля 2013 года ГЕОЛОГИЯ, ГЕОФИЗИКА И ГЕ ОЭКОЛОГИЯ УДК 553. 411 ' 44 (598) СТРУКТУРНЫЕ УСЛОВИЯ ФОРМИРОВАНИЯ ОЛОВОРУДНОГО РАЙОНА НАМПАТЕН (НДР ЛАОС) Суваннудом Б.1, Слободчиков Е. А.2 Народно-демократическая республика Лаос ФГБОУ ВПО "Уральский государст...»

«Экологическое занятие Подготовила и провела воспитатель высшей категории Васильева С.А "Лесное царство" Цель: закрепить знания о лесе, как о экосистеме.Задачи: — дать детям представление о том, что лес – это жи...»

«Вестник Тюменского государственного университета. 20 Экология и природопользование. 2016. Т. 2. № 4. С. 20–32 Павел Евгеньевич КАРГАШИН1 Платон Сергеевич ЯСЕВ2 УДК 528.87+528.94 КАРТОГРАФИРОВ...»

«ISSN 1727-9712 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ГИГИЕНЫ ТРУДА И ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ЕБЕК ГИГИЕНАСЫ ЖНЕ МЕДИЦИНАЛЫ ЭКОЛОГИЯ ГИГИЕНА ТРУДА И МЕДИЦИНСКАЯ ЭКОЛОГИЯ № 2 (47), 2015 г. O...»

«АДМИНИСТРАЦИЯ АКСАЙСКОГО РАЙОНА ПОСТАНОВЛЕНИЕ № 12. 10. 2016 459 г. Аксай Об утверждении административного регламента по предоставлению муниципальной услуги "Устранение технических ошибок в правоустанавливающих документах о предоставлении земельного участка, принятых органами местного...»

«Гончаров Владимир Михайлович АГРОФИЗИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЧВ В КОМПЛЕКСНОМ ПОЧВЕННОМ ПОКРОВЕ Специальность: 06.01.03 – агрофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре физики и мелиорации почв факультета почвоведения Московского государственно...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "САРАТОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ Н.Г. ЧЕР...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "САРАТОВСКИЙ НАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ Н.Г.ЧЕРНЫШЕВСКОГО" Кафедра физики открытых систем Исследование нелинейной динамики различных моделей экологи...»

«Семинар-Диалог по оценке коллективных действий в области сохранения биоразнообразия Панахачель, Гватемала | 11-13 июня 2015 Краткий отчет Сопредседателей. Эдгар Сельвин Перес и Мария Шульц. Сопредседатели Правительство Гватемалы и Секретариат Конве...»

«Светлова Марина Всеволодовна КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ЭКОЛОГО-ГЕОГРАФИЧЕСКОГО ПОЛОЖЕНИЯ ПРИМОРСКИХ ТЕРРИТОРИЙ (НА ПРИМЕРЕ МУРМАНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 25.00.36 – Геоэкология (Науки о Земле) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата геогр...»

«ISSN 0131 7741. “Экономика Украины”. — 2014. — 5 (622) УДК 502 – 630*64 А. Н. Б О Б К О, кандидат сельскохозяйственных наук, Почетный доктор, ведущий научный сотрудник Института агроэкологии и природопользования НААН Украины (Киев) ЭКОНОМИКА ЛЕСОВОДСТВА НАЧИНАЕТСЯ С...»























 
2017 www.kn.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные ресурсы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.