WWW.KN.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные ресурсы
 


Pages:     | 1 ||

«РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ (19) (11) (13) RU 2 423 379 C2 (51) МПК C07K 14/47 (2006.01) C07K 5/10 (2006.01) C07K 7/04 (2006.01) A61K 38/17 (2006.01) A61K 38/07 ...»

-- [ Страница 2 ] --

Нормальный солевой раствор, стерилизованный фильтрованием; Ацетат натрия, 150 мкМ, стерилизованный фильтрованием; RNS Пептид - 140 мкМ раствор в 150 мкМ растворе, стерилизованного фильтрованием, ацетата натрия и MANS Пептид мкМ раствор в 150 мкМ растворе, стерилизованного фильтрованием, ацетата натрия.

.: 47 RU 2 423 379 C2

В. Тестируемые животные:

Резус-макаки; число животных: 17; пол: все здоровые самцы; возраст: 3-4 года; вес тела: 4-7 кг, в среднем 5,03 кг; период акклиматизации: 7 дней; метод идентификации:

уникальная татуировка в виде 5-значного ID номера; история: всех животных за 12месяца до этого теста использовали для исследования вакцины, а именно иммунизации против менингита. Все животные также получали обычную иммунизацию против кори и столбняка во время младенчества.

С. Ведение животных:

Уход за животными: условия соответствуют стандартным плановым процедурам, которые основаны на «Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных».

Пища: стандартную диету резус-макакам обеспечивали ежедневно; вода:

свободно доступную муниципальную воду доставляли посредством автоматической водопроводной системы; размещение: животных размещали индивидуально в проверенных коррозийно-стойких стальных клетках, идентифицированных с помощью карточки, показывающей число животных, код теста, пол, код животного;

окружающая среда: комнатную температуру измеряли ежедневно. Температурные границы для комнаты находились в пределах 20-26°С. Влажность в комнате измеряли ежедневно, границы влажности находились в пределах 40-70%. Световой цикл контролировали, используя автоматический таймер (12 часов света, 12 часов темноты); персонал: вовлеченные сотрудники были соответствующе квалифицированы и обучены работе с приматами.

Результаты Результаты представляют данные о том, что RNS пептид, буфер ацетата натрия или нормальный солевой раствор не имеют никакого влияния на секрецию слизи, тогда как почти 75% MANS пептидов ингибируют секрецию слизи.

Пример 5 - Метод культур клеток тканей для определения секретирующегося муцина в бронхиальных эпителиальных клетках человека HBE1 представляет собой вирус-трансформированную бронхиальную эпителиальную клеточную линию человека, способную к секреции муцина при культивировании в пограничных условиях воздуха и жидкости. HBE1 клетки культивировали в пограничных условиях воздуха и жидкости, как описано ранее (Li et al., J.Biol.Chem., volume 276, pp 40982-40990, 2001). Коротко, HBE1 клетки культивировали в пограничных условиях воздуха и жидкости путем рассевания подходящего количества клеток в 12-луночные чистые культуральные планшеты (Costar, Cambrige, MA), которые были покрыты тонким слоем коллагена типа I, выделенного из крысиного хвоста (Collaborative Biomedical, Bedford, MA).

Вначале, в течение 5-7 дней при влажности воздуха 95% и 5% СО2 в окружающем пространстве клетки культивировали погруженными в среду до тех пор, пока клетки не будут располагаться близко друг к другу. В это время создавали пограничные условия воздуха и жидкости путем удаления апикальной части среды и осуществляли 45 питание клеток латерально. После этого среду меняли ежедневно. Клетки дополнительно культивировали еще 14 дней, чтобы достичь полной дифференциации. Накопленный муцин на апикальной поверхности клеток удаляли с помощью промывания солевым раствором в фосфатном буфере, рН 7,2. Чтобы собрать базовую секрецию муцина, клетки инкубировали в течение 30 мин в одной среде и собирали муцин, секретированный в апикальную среду, и оценивали его количество с помощью ELISA. Чтобы определить гиперсекрецию муцина, индуцированную секреторным средством, индуцирующим муцин, клетки

–  –  –





Наряду с тем, что изобретение описали в деталях и со ссылкой на его специфические воплощения, будет бесспорно для всякого квалифицированного в области техники, что различные изменения и модификации могут быть осуществлены без выхода за рамки сущности и объема изобретения.

Формула изобретения

1. Выделенный концевой модифицированный пептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

(a) последовательности из 24 аминокислот, имеющей последовательность GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1), или аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену в указанной эталонной последовательности, выбранную из группы, состоящей из замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е;

(b) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1), или аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену в указанной эталонной последовательности, выбранную из группы, состоящей из замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е, причем аминокислотная последовательность пептида начинается с Nконцевой аминокислоты эталонной последовательности; и (с) аминокислотной последовательности, имеющей от 4 до 23 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1), или аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену в указанной эталонной последовательности, выбранную из группы, состоящей из замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е, причем аминокислотная последовательность пептида начинается с аминокислоты в положении 2 до аминокислоты в положении 21 эталонной последовательности (SEQ ID NO: 1); и причем (i) С-концевая карбоксильная группа С-концевой аминокислоты пептида амидирована и N-концевая аминогруппа N-концевой аминокислоты пептида ацетилирована, или (ii) С-концевая карбоксильная группа С-концевой аминокислоты пептида амидирована и N-концевая аминогруппа N-концевой аминокислоты пептида химически не модифицирована, или (iii) С-концевая карбоксильная группа С-концевой аминокислоты пептида химически не модифицирована и N-концевая аминогруппа N-концевой аминокислоты пептида ацетилирована, и когда аминокислотная последовательность пептида представляет собой (а) или (b), N-концевая аминокислота не миристоилирована; и.: 54

–  –  –

когда аминокислотная последовательность (b) и (с) состоит из 4 аминокислот, указанная последовательность содержит SEQ ID NO: 211-221 или 223-230;

где пептид имеет эффект ингибирования гиперсекреции муцина при введении млекопитающему в количестве, ингибирующем гиперсекрецию муцина.

2. Пептид по п.1, где аминокислотная последовательность пептида начинается с Nконцевой аминокислоты эталонной последовательности.

3. Пептид по п.1, где аминокислотная последовательность пептида начинается с аминокислоты в положении 2 до аминокислоты в положении 21 эталонной последовательности.

4. Пептид по п.1, где аминокислотная последовательность пептида заканчивается С-концевой аминокислотой эталонной последовательности.

5. Пептид по п.1, где аминокислотная последовательность пептида включает последовательно расположенные остатки AKGE (SEQ ID NO: 219) эталонной последовательности.

6. Пептид по любому из пп.1-5, где аминокислотная последовательность пептида состоит из 4-16 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности или аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену в указанной эталонной последовательности, выбранную из группы, состоящей из замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е.

7. Пептид по любому из пп.1-5, где аминокислотная последовательность пептида состоит из 8-14 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности или аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену в указанной эталонной последовательности, выбранную из группы, состоящей из замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е.

8. Пептид по любому из пп.1-5, где аминокислотная последовательность пептида состоит из 10-12 последовательно расположенных аминокислот эталонной последовательности или аминокислотной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену в указанной эталонной последовательности, выбранную из группы, состоящей из замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е.

9. Пептид по любому из пп.1-5, где одна или несколько дополнительных аминокислот пептида независимо алкилированы, амидированы, ацилированы или этерифицированы.

10. Пептид по любому из пп.1-5, где N-концевая аминокислота пептида ацетилирована по N-концевой аминогруппе.

11. Пептид по п.1, который выбран из группы, состоящей из ацетил-ПЕПТИД 106, ацетил-ПЕПТИД 103-NН2, ПЕПТИД 106-NH2, ПЕПТИД 234-NH2 и ацетилПЕПТИД 219.

45 12. Пептид по п.1, который выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15, SEQ ID

NO: 45, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 153, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 233, SEQ ID NO:

234 и SEQ ID NO: 235.

13. Пептид по п.1, который выбран из группы, состоящей из SEQ ID NO: 233-245 и SEQ ID NO: 247-251.

14. Пептид по любому из пп.1-5, 11, 12 или 13, где последовательность содержит аминокислотную последовательность эталонной последовательности, имеющей по меньшей мере одну аминокислотную замену, выбранную из группы, состоящей из.: 55 RU 2 423 379 C2 замены А на К, замены F, К, G, Q, S, Т и/или Е на А; или замены Q на Е.

15. Пептид по п.1, имеющий аминокислотную последовательность GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO: 1), где Nконцевая аминокислота пептида ацетилирована.

16. Пептид по любому из пп.1-5 или 12-13, где С-концевая аминокислота пептида амидирована по С-концевой карбоксильной группе аминогруппой, выбранной из группы, состоящей из: аммиака, С1-С24 алифатической алкиламиногруппы, гидроксил замещенной С2-С24 алифатической алкиламиногруппы, линейной 2-(С1С24 алифатический алкил)оксиэтиламиногруппы или омега-метоксиполи(этиленокси)n-этиламиногруппы, где n составляет от 0 до 10.

17. Пептид по любому из пп.1-5 или 12-13, который проявляет, по меньшей мере, одно из свойств: (а) больший эффект ингибирования гиперсекреции муцина у млекопитающего, чем проявляет последовательность SEQ ID NO: 1, у которой Nконцевая аминокислота миристоилирована, при введении указанному млекопитающему в равных концентрациях, или (b) большая растворимость в воде, чем у последовательности SEQ ID NO: 1, у которой N-концевая аминокислота миристоилирована, при равных концентрациях в одной и той же жидкости.

18. Фармацевтическая композиция, ингибирующая гиперсекрецию муцина, содержащая терапевтически эффективное количество пептида по любому из пп.1-17 и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель и/или разбавитель.

19. Пептид по любому из пп.1-5, 11-13, 15 для применения в качестве лекарственного средства, обладающего активностью, ингибирующей гиперсекрецию муцина.

20. Пептид по любому из пп.1-5, 11-13, 15 для применения при лечении гиперсекреции муцина.

21. Пептид по п.20, где гиперсекреция муцина является симптомом легочного заболевания.

22. Пептид по п.21, где легочное заболевание представляет собой астму, хронический бронхит, COPD, кистозный фиброз или ринит.

23. Применение пептида по любому из пп.1-17 для производства лекарственного средства для лечения гиперсекреции муцина.

24. Применение по п.23, где гиперсекреция муцина является симптомом легочного заболевания.

25. Применение по п.24, где легочное заболевание представляет собой астму, хронический бронхит, COPD, кистозный фиброз или ринит.

26. Способ ингибирования гиперсекреции муцина у млекопитающего, включающий введение млекопитающему ингибирующего гиперсекрецию муцина количества фармацевтической композиции по п.18, которая ингибирует гиперсекрецию муцина.

27. Способ по п.26, где гиперсекреция муцина является симптомом легочного 45 заболевания.

28. Способ по п.27, где легочное заболевание представляет собой астму, хронический бронхит, COPD, кистозный фиброз или ринит.

–  –  –

.: 160



Pages:     | 1 ||



Похожие работы:

«Действие токов и полей на ткани организма. Методы физиотерапии Электрические свойства биологических тканей и стоматологических материалов Электрический ток – упорядоченное движение свободных заряженных частиц Электр...»

«Санаторий "Лунево" Костромская область Лунево располагается в экологически чистом районе, окруженном лесом, на берегу реки Волги вблизи древнего города Кострома. Размещение В санатории Лунево 152 номера различной категории на 300 мест. Размещение в 2-х благоустроенных 3-х и 4-х этажных ко...»

«ДИСПАНСЕРИЗАЦИЯ ВЗРОСЛОГО НАСЕЛЕНИЯ (КРАТКАЯ ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ГРАЖДАН О ДИСПАНСЕРИЗАЦИИ И ПОРЯДКЕ ЕЕ ПРОХОЖДЕНИЯ) Диспансеризация проводится бесплатно по полису ОМС в поликлинике по месту жительства (прикрепления) в соответствии с приказом Министерства здравоохранения Российской Федерации от 03.12.20...»

«Устав зеленых Европы Руководящие принципы Партии зеленых Европы Принят на 2-ом съезде ПЗЕ Женева, 13-14 октября 2006 года Коротко о нас Зеленые Европы с гордостью заявляют, что они сторонники устойчивого развития человечества на Земле, развития, которое основывается на принципах уважения прав человека, экологической ответственности, своб...»

«Институт законодательства и сравнительного правоведения при Правительстве Российской Федерации ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВО О РЫБОЛОВСТВЕ И СОХРАНЕНИИ ВОДНЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ В ВОПРОСАХ И ОТВЕТАХ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ Руководитель авторского коллектива кандидат ю...»

«Мензбирлік орнитологиялы оамы л-Фараби атындаы аза лтты университеті азастан Республикасы БМ К "Зоология институты" РМК СОЛТСТІК ЕУРАЗИЯНЫ XIV ХАЛЫАРАЛЫ ОРНИТОЛОГИЯЛЫ КОНФЕРЕНЦИЯСЫ (Алматы, 18-24 тамыз 2015 ж.) I. Тезистер Бізді демеушілеріміз: "Мензбирлік орнитологиялы оамы" "азастанны лтты географиялы оамы (Г...»

«ОГРАНИЧЕНИЯ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ И РЕАБИЛИТАЦИЯ ПРИ НАРУШЕНИЯХ РИТМА СЕРДЦА Санкт Петербург СпецЛит УДК 616 036.8 О 39 Авторы составители: Заболотных Инга Ивановна — доктор медицинских наук; Кантемирова Раиса Кантемировна — кандидат медицинских наук; И...»








 
2017 www.kn.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные ресурсы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.