WWW.KN.LIB-I.RU
БЕСПЛАТНАЯ  ИНТЕРНЕТ  БИБЛИОТЕКА - Различные ресурсы
 


Pages:     | 1 ||

«МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ В БИОТЕХНОЛОГИИ краткий курс лекций для аспирантов Направление подготовки 06.06.01 Биологические науки Профиль подготовки Биохимия ...»

-- [ Страница 2 ] --

В одних методах используют поглощение (или испускание, рассеяние и т.д.) энергии атомами, в других происходит взаимодействие электромагнитного излучения сразу со всей молекулой вещества. Деление спектроскопических методов на атомные и молекулярные принципиально: в атомной спектроскопии имеют дело с узкими линейчатыми спектрами, в молекулярной – с широкими полосатыми. Очевидно, от того, атомные или молекулярные спектры исследуются, зависит и характер получаемой информации. Обычно спектроскопические методы анализа классифицируют двояко.

АТОМНЫЕ МОЛЕКУЛЯРНЫЕ

–  –  –

АБСОРБЦИ- РАССЕЯЭМИССИ- ЛЮМИНЕСОННЫЕ НИЯ

ОННЫЕ ЦЕНТНЫЕ

–  –  –

Так, имеются атомно-абсорбционные, молекулярно-абсорбционные, молекулярнолюминесцентные и т.д. методы, причем каждая группа может включать в себя несколько методов анализа. Часто в названии метода указывают и используемый диапазон электромагнитного спектра.

Нельзя сказать, что все группы одинаково применимы. Так, металлы и их сплавы часто анализируют методом атомной эмиссионной спектроскопии. Для этого объект анализа подвергают высокотемпературному возбуждению (нагревают до нескольких тысяч градусов). Понятно, что аналогичное воздействие на большинство сложных молекул (в особенности, органических веществ) приведет к распаду их на отдельные атомы, и о строении вещества судить будет сложно: получаемая информация будет ограничена элементным составом анализируемого объекта. С другой стороны, как вы узнаете позже, не каждое вещество взаимодействует с любым видом излучения.

В каждой области деятельности более важны те или другие методы анализа.

Атомно-эмиссионная спектроскопия Методы атомной спектроскопии отличаются высокой избирательностью, исключительной чувствительностью и экспрессностью. Этими методами определяют до 70 элементов. Чувствительность обычно лежит в интервале от 10-4 до 10-8 масс. %. Однако диапазон определяемых содержаний невелик и редко превышает один порядок концентрации.

Атомно-эмиссионная спектроскопия основана на испускании квантов электромагнитного излучения возбужденными атомами. Т.о., общий ход процесса укладывается в схему: А + Е А* А + h, где А – атом элемента, А* - возбужденный атом, Е – энергия, поглощаемая атомом, h - испускаемый квант света.

При поглощении атомом энергии 100 - 600 кДж/моль внешний электрон переходит на один из более высоких энергетических уровней и примерно через 10-8 с возвращается на основной (или какой-то другой) уровень. При этом энергия выделяется либо в виде кванта света определенной частоты, либо теряется в виде теплоты при столкновениях с другими частицами.

В атоме возможны только электронные переходы. Разность энергий электронных уровней достаточно велика, поэтому спектр атома состоит из отдельных линий.

Поскольку число возможных электронных переходов значительно, эмиссионный спектр атома состоит из множества спектральных линий различной интенсивности.

Интенсивность линии зависит от количества атомов, в которых осуществляется соответствующий переход, т.е. от количества атомов в пробе и от вероятности соответствующего перехода. Наиболее вероятны переходы с возбужденного уровня, ближайшего к основному. Спектральные линии, соответствующие такому переходу, называют резонансными. Они обладают наибольшей интенсивностью, их чаще всего используют в анализе.





В атомной спектроскопии вещество перед измерением надо атомизировать. При атомизации одновременно происходит и возбуждение атомов. Важнейшей характеристикой любого атомизатора является температура, от которой, в конечном счете, зависят метрологические характеристики анализа.

Атомизаторы бывают пламенные и непламенные. В соответствии с этим различают несколько вариантов метода.

Эмиссионная фотометрия пламени Эмиссионная фотометрия пламени применяется в основном для количественного анализа легковозбудимых атомов. Метод основан на измерении интенсивности излучения, испускаемого атомами, возбуждаемыми в пламени. Использование пламени оказалось более удобным в практическом отношении, чем использование других источников энергии. Оно образуется при сгорании различных органических веществ и имеет сравнительно невысокую температуру (1500-30000С). Ее достаточно для получения резонансных линий наиболее легковозбудимых атомов (в основном щелочных или щелочноземельных металлов). Анализируемый раствор непосредственно вводят в пламя горелки.

То, что спектр содержит в основном резонансные линии и не содержит лишней информации, является несомненным достоинством метода. Кроме того, достоинствами пламени являются его стабильность, простота конструкций горелок, малая степень ионизации атомов. Недостатки – наличие фонового излучения (пламя само "светится"), небольшой процент возбуждаемых атомов (из-за невысокой температуры). Стабильность пламени приводит к высокой воспроизводимости результатов анализа (sr 0,01 – 0,05).

В пламени происходят следующие процессы:

- испарение растворителя;

- испарение твердых частиц с образованием атомного пара;

- диссоциация молекул на атомы;

- частичная ионизация;

- возбуждение атомов;

- возвращение атомов в исходное состояние с испусканием света.

Интенсивность излучения пропорциональна концентрации атомов в пламени, а следовательно, и в исходном растворе: I = К. С. Однако на коэффициент пропорциональности могут повлиять самопоглощение, ионизация, образование нелетучих соединений, инструментальные причины и др. Поэтому при количественном анализе метод требует наличия эталонов, т.е. стандартных растворов определяемых веществ.

В практическом отношении отдают предпочтение методу градуировочного графика (зависимость показаний шкалы прибора от концентрации). При анализе объектов сложного состава обычно используют метод добавок.

Особое значение метод фотометрии пламени имеет для определения микроколичеств элементов с низкими потенциалами возбуждения, т.е. в первую очередь щелочных и щелочноземельных металлов. Для них предел обнаружения составляет 0,001 – 1 мкг/мл. Основными ограничениями метода являются необходимость переведения пробы в раствор, сильное влияние матричных элементов и обычно одноэлементность анализа.

Непламенные варианты атомно-эмиссионной спектроскопии Если температуры пламени недостаточно для возбуждения атомов, используют дуговые и искровые электротермические источники.

Дуговая и искровая эмиссионная спектроскопия применяются в основном для целей качественного анализа. Количественный анализ также возможен, но не обладает высокой точностью. Это связано с нестабильностью работы непламенных атомизаторов. Самый современный источник атомизации – индуктивно связанная плазма – обладает наилучшими аналитическими возможностями, но применяется редко из-за очень высокой стоимости оборудования.

Дугу получают при пропускании тока 1-30 А при напряжении 200 В, искру – при напряжении до 40 кВ. Электроды чаще всего используют графитовые. В углубление одного из них помещают пробу, обычно твердую. Если исследуемый материал – металл, он сам может выступать в качестве одного из электродов. В пространстве между электродами при разряде образуется плазма, состоящая из атомов, ионов и электронов с температурой до 7000 К в дуге и до 10000 К в искре. При этом в атомах и ионах осуществляется большое число энергетических переходов, поэтому эмиссионные спектры состоят из множества линий. В таких источниках можно возбудить практически все элементы. Трудности возникают лишь в случае некоторых неметаллов, характеризующихся высокими потенциалами возбуждения.

Излучение воспринимают визуально, регистрируют на фотопластинке или преобразуют в электрический сигнал с помощью фотоэлементов или фотоумножителей.

Качественный анализ проводят, сравнивая полученные спектры со спектрами элементов, приводимыми в специальных атласах. Для качественного элементного анализа метод, пожалуй, не имеет равных: он высокоспецифичен, не требует предварительной обработки вещества, позволяет при кратковременном облучении нескольких миллиграммов образца обнаружить до 70 элементов.

Задача качественного спектрального анализа состоит в отыскании линий нужного элемента в спектре пробы. Принадлежность линии данному элементу устанавливают по длине волны и интенсивности линии. Но, поскольку число линий может быть очень велико, нет необходимости обрабатывать каждую из них. Необходимо установить наличие или отсутствие нескольких так называемых аналитических (последних) линий.

Последними они называются потому, что являются наиболее интенсивными и сохраняются в спектре даже тогда, когда при сильном разбавлении пробы большинство линий не проявляется. Отсутствие последней линии гарантирует отсутствие и других, т.е. отсутствие данного элемента в пробе.

Количественный анализ основан на зависимости интенсивности спектральной линии от концентрации вещества в пробе. При высоких температурах на аналитическом сигнале резко сказывается самопоглощение излучения пробой. Степень самопоглощения возрастает с увеличением концентрации атомного пара, поэтому интенсивность свечения зависит от концентрации нелинейно.

Наиболее удовлетворительно градуировочная функция описывается эмпирической формулой Ломакина – Шайбе:

I = a. cb, где а и b – коэффициенты, зависящие от условий опыта.

Для построения градуировочного графика удобно переписать это уравнение в логарифмической форме:

lg I = lg a + b lg c = const + b lg c и строить графики в координатах зависимости аналитического сигнала (логарифма интенсивности) от логарифма концентрации.

На одной и той же пластинке снимают спектр исследуемого образца и спектры не менее трех эталонов. Эталоны должны быть как можно ближе по составу к анализируемому образцу. Для повышения воспроизводимости почти никогда не измеряют абсолютное значение сигнала, а пользуются разностью между интенсивностями линии определяемого элемента и линии элемента сравнения. Для этого обычно используют т.н. внутренние стандарты. Внутренний стандарт представляет собой компонент, содержание которого во всех исследуемых образцах одинаково. Это может быть компонент основы (например, железо – при анализе сталей) или специально вводимое вещество. Две сравниваемые линии называют гомологической парой. Полученный таким образом график пригоден только для данной фотопленки (или данного фотоэлемента).

Значение эмиссионной спектроскопии для количественного анализа ограничено трудностями воспроизведения интенсивности излучения. Обычно погрешность ДОСтигает 10-20 и более %. Поэтому при определении основы этот метод не применяют.

Однако при анализе следов, где точность анализа обычно не является решающим показателем, метод эмиссионной спектроскопии используют часто, в основном благодаря его высокой чувствительности и экспрессности.

Классификация методов абсорбционной спектроскопии Характер спектра поглощения определяется природой, агрегатным состоянием и окружением поглощающих веществ. Различают спектры, связанные с поглощением электромагнитного излучения атомами, и спектры, возникающие при поглощении излучения молекулами. Соответственно различают методы атомной и молекулярной абсорбционной спектроскопии.

Вероятно, молекулярная абсорбционная спектроскопия нашла более широкое применение, чем атомная. Это связано с гораздо большими возможностями, реализуемыми при интерпретации молекулярных спектров поглощения.

Система, содержащая атомы лишь одного типа, поглощает сравнительно немного частот электромагнитного излучения, при этом энергии видимого и ультрафиолетового излучений достаточно лишь для того, чтобы вызвать переходы внешних (валентных) электронов. Рентгеновское излучение, обладающее гораздо большей энергией, способно к взаимодействию с электронами, расположенными ближе к ядру. Поскольку внутренние электроны не участвуют в образовании химических связей, спектр поглощения рентгеновского излучения не зависит от природы химического соединения, в которое входит рассматриваемый атом. Более жесткое гамма-излучение способно к взаимодействию с ядром, приводящему к превращению в другие элементы.

Поэтому методы анализа, связанные с использованием гамма-излучения, часто относят к группе радиохимических методов.

Поглощение излучения многоатомными молекулами, особенно в жидком и твердом состоянии, представляет собой значительно более сложный процесс, поскольку число возможных энергетических состояний при объединении атомов в молекулу сильно возрастает. Соответственно и число видов электромагнитного излучения, которые могут быть использованы в абсорбционной спектроскопии, в случае молекул больше.

Так, инфракрасное излучение может вызвать изменение колебательного состояния атомов в молекуле, а СВЧ-излучение влияет на вращение молекулы как целого.

Поскольку некоторые виды излучения взаимодействуют и с атомами, и с молекулами, а другие – только с молекулами или с атомами независимо от их ближайшего окружения, трудно дать четкую классификацию всех имеющихся методов абсорбционной спектроскопии. К сожалению, в связи с этим бывает и трудно разобраться в терминологии, предлагаемой авторами различных книг и монографий по спектроскопическому анализу. Все же, вероятно, удобнее разбить методы абсорбционной спектроскопии по природе используемого излучения.

В любом из этих методов аналитический сигнал несет информацию и о качественном, и о количественном составе образца. Однако каждый из них обладает преимуществами в той или иной области анализа.

Для проведения количественного анализа в абсорбционной спектроскопии необходимо измерение мощности излучения, прошедшего через образец, и знание количественных законов поглощения. Основные положения и законы абсорбции излучения справедливы для всех областей спектра – от рентгеновского до радиоизлучения.

Методы абсорбционной спектроскопии Излучение Переходы Метод Основное назначение Гамма- ядерные активационный определение частицы анализ примесей Рентгеновское внутренние рентгеновская анализ твердых электроны спектроскопия веществ УФ-, внешние спектрофотометрия, количественный анализ видимое электроны ААС растворов Инфракрасное молекулярные ИК-спектроскопия идентификация колебания орг. веществ СВЧ- молекулярное микроволновая анализ газов вращение спектроскопия Радиоволны (+ ядерно- ядерно-магнитный исследование магнитное поле) спиновые резонанс строения орг. веществ Мощность электромагнитной волны квантована, поскольку ее можно рассматривать как поток фотонов. Следовательно, рассматривая прохождение электромагнитного излучения через кювету с веществом, можно утверждать, что степень поглощения зависит от числа столкновений между фотонами и способными их поглощать частицами. Очевидно, эта степень должна зависеть от мощности падающего излучения (т.е. числа фотонов) и от концентрации частиц пробы. Эти соотношения отражены в объединенном законе Бугера – Ламберта – Бера.

Атомно-абсорбционная спектроскопия Атомно-абсорбционная спектроскопия (ААС), предложенная в 1955 г., основана на поглощении электромагнитного излучения видимого и УФ-диапазона свободными атомами, находящимися в газовой фазе. При этом атомы из нижнего (невозбужденного) состояния переходят в возбужденное, а интенсивность излучения уменьшается. Таким образом, если в атомно-эмиссионной спектроскопии аналитический сигнал пропорционален числу возбужденных атомов, то в атомноабсорбционной спектроскопии он пропорционален числу невозбужденных атомов.

Следует хорошо понимать, что, как и в условиях атомно-эмиссионного анализа, атомы, возбудившись, могут испускать электромагнитное излучение. Этот процесс не должен интересовать аналитика; более того, он может помешать при анализе.

Предварительно необходимо перевести пробу в атомарное состояние (атомизировать), а затем измерить ослабление интенсивности излучения, прошедшего через поглощающую среду. Такие измерения проводят в условиях, когда выполняется закон Бугера – Ламберта – Бера. При этом величину lg I0/Il называют атомным поглощением, но она полностью аналогична оптической плотности.

Поскольку в ААС аналитический сигнал получают от невозбужденных атомов, для атомизации подходят лишь такие источники, энергии которых хватает для распада молекул на атомы, но не для возбуждения последних. Этим требованиям удовлетворяют пламенные и непламенные атомизаторы, в которых используется тепловая энергия. Перед атомизацией объект анализа обычно переводят в раствор.

Пламенные атомизаторы – горелки, с использованием в качестве горючей смеси обычно смесей воздуха с ацетиленом или оксида азота (I) с ацетиленом. Пламя в атомно-абсорбционном анализе выполняет функцию не только атомизатора, но и кюветы. Исходя из закона светопоглощения, чем больше длина используемого пламени, тем выше чувствительность метода. Поэтому разработаны специальные щелевые горелки, обеспечивающие длину поглощающего слоя до 10 см. Для определения элементов, легко переходящих в атомное состояние (медь, свинец, цинк, кадмий) может быть использовано даже низкотемпературное воздушно-газовое пламя.

С другой стороны, многие элементы (алюминий, бериллий, РЗЭ) не могут быть проанализированы даже в высокотемпературном пламени, и для их определения сконструированы непламенные атомизаторы.

Электротермические атомизаторы – высокотемпературные печи специальной конструкции с температурой до 30000С. Их основная деталь – графитовая кювета, нагреваемая при помощи электрического тока большой силы (до 50 А) при низком напряжении. Применение графитовых кювет позволяет снизить пределы обнаружения почти всех элементов, что ставит атомно-абсорбционный анализ в ряд наиболее чувствительных методов. При этом имеется возможность анализа проб очень малого объема (до 1 мкл), а также твердых веществ без переведения их в раствор. Расширяется спектральный диапазон измерений в область УФ-лучей, что невозможно в пламени изза поглощения кислорода.

Итак, на атомы, переведенные тем или иным образом в парообразное состояние, теперь надо направить поток электромагнитного излучения подходящей длины волны и посмотреть, что с ним будет после прохождения пламени или кюветы с образцом.

Линии поглощения атомов в пламени или графитовой кювете очень узки – около 0,001 нм, тогда как самые лучшие монохроматоры позволяют выделить из спектра участок не менее 0,1 нм.

Казалось бы, в этом нет ничего страшного: атомы сами "выберут" то излучение, которое могут поглотить, и останется только зафиксировать долю поглощенного излучения. Однако на практике использование обычных источников непрерывного спектра с монохроматором непригодно. Дело в том, что при этом атомы поглотят столь малую долю падающего излучения, что детектор не уловит разницу между падающим и прошедшим через образец излучением. Следовательно, чтобы поглощение атомами было заметно, нужно направлять на пробу излучение практически монохроматичное.

Строгие требования к энергии квантов и полуширине линии лучше всего удовлетворяются, если использовать в приборе в качестве источника света характеристическое излучение атомов исследуемого элемента. Чаще всего для этого применяют лампы с полым катодом, изготовленным как раз из того металла, который собираются определять. В этой лампе между инертным электродом (анодом) и вторым электродом (катодом), сделанным из определяемого элемента, возникает электрический разряд малой мощности. Атомы катода возбуждаются, давая очень чистый линейчатый спектр определяемого элемента. Такая лампа испускает линейчатый спектр таких длин волн, которые может поглотить образец, и роль селектора частоты, помещаемого после лампы, сводится лишь к тому, чтобы из набора линий выделить одну, поглощение которой необходимо измерить. Очевидно, для определения каждого металла нужна своя лампа, что делает анализ, с одной стороны, не очень универсальным, но с другой – довольно избирательным. Конечно, можно изготовить катод из сплава нескольких металлов. Но в связи с тем, что могут иметь место влияния, оказываемые друг на друга различными элементами, лампы, испускающие одновременно спектры более чем трех элементов, не выпускают.

Лучшим источником монохроматичного излучения для ААС является, несомненно, лазер, перестраиваемый по частоте. В настоящее время существует большое число таких лазеров на полупроводниках, но проблема точного установления требуемой длины волны и высокая стоимость таких источников сдерживают пока их широкое применение в атомно-абсорбционном анализе.

При стабильной работе источника излучения, атомизатора и детектора сигнал прямо пропорционален концентрации определяемого компонента, что позволяет использовать для определения концентрации как метод градуировочного графика, так и метод добавок. Помехи аналогичны таковым в эмиссионных методах.

Атомно-абсорбционная спектроскопия – высокочувствительный метод определения более 60 металлов и некоторых неметаллов. Трудности в анализе неметаллов состоят в том, что их резонансные линии лежат в основном в области дальнего ультрафиолета.

Для некоторых элементов пределы обнаружения в непламенном варианте ААС составляют 5.10-5 – 1.10-3 мкг/мл (т.е. до 10-9 моль/л). А поскольку объем необходимой пробы невелик, метод часто позволяет проанализировать до 10-14 г вещества.

Предварительная обработка образцов сводится к минимуму, а заключительные процедуры просты и не требуют длительного времени. В связи с этим важным достоинством метода является не только высокая избирательность, но и экспрессность.

В некоторых случаях целесообразно предварительно выделить определяемый компонент. Для этой цели очень подходит экстракция, поскольку применение органических растворителей может увеличить чувствительность определений в несколько раз. Воспроизводимость ААС 1-5 %. Недостатки метода – трудность осуществления многоэлементного анализа и небольшой интервал линейности градуировочного графика (максимум 2-3 порядка).

Атомно-абсорбционная спектроскопия используется главным образом для определения примесных составляющих. Единственное ограничение по отношению к типу исследуемых образцов состоит в том, что они должны растворяться с образованием водных или неводных растворов. Число элементов, которые можно определить этим методом, ограничивается наличием подходящего источника излучения и возможностью создания атомного пара. Метод применяется при анализе вод, вытяжек из почвы, биологических веществ, удобрений, нефти, стали, сплавов и различных других материалов. В целом правильно будет сказать, что методы атомноабсорбционного и атомно-эмиссионного анализа органично дополняют друг друга.

–  –  –

1. Основы атомно-абсорбционной спектрометрии.

2. Основы атомно-эмиссионной спектрометрии.

3. Классификация методов абсорбционной спектроскопии.

4. Непламенные варианты атомно-эмиссионной спектроскопии.

5. Эмиссионная фотометрия пламени

1. Димитриев, А.Д. Биохимия: учебное пособие / А.Д. Димитриев, Е.Д. Амбросьева.

– М.: Дашков и К, 2013. – 168 c. – ISBN 978-5-394-01790-2 // Доступ с сайта научной библиотеки СГАУ – ЭБС IPRbooks.

2. Основы аналитической химии: в 2 т. Т. 1 / ред. Ю. А. Золотов. – 4-е изд., доп. и перераб. – М. : Академия, 2010. – 384 с. – ISBN 978-5-7695-5821-4

Дополнительная литература

1. Аналитическая химия. Проблемы и подходы /ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 1. – М: МИР, 2004. – 608 с. – ISBN 5-03-003560-5, ISBN 3-527Аналитическая химия. Проблемы и подходы / ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 2. – М: МИР, 2004, 625 С. – ISBN 5-03-003599-1, ISBN 3-527Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение: Пер. с англ. / Б.

Глик, Дж. Пастернак. – М. : Мир, 2002.

4. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н.

Прудникова.– 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: ГИОРД, 2009. – 472 с. – ISBN 5-98879-008-9

5. Лебедев А. Т. Масс-спектрометрия в органической химии. – М: «Бином», 2003, 493 С. – ISBN 5-94774-052-4.

6. Основы аналитической химии: учебник; в 2 кн. Кн. 2. Методы химического анализа / Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова, В.И. Фадеева ; ред. Ю. А. Золотов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М. : ВШ, 2000. – 494 с. – ISBN 5-06-003559-Х.

7. Он-лайн учебник по биохимии – www.Biochemistry.ru

8. Сайт о химии – www.xumuk.ru

9. Электронная библиотека СГАУ – http://library.sgau.ru

–  –  –

Классификация погрешностей анализа Существует несколько различных подходов к классификации погрешностей анализа, основанных на рассмотрении различных аспектов этого понятия.

1. По способу представления погрешности принято делить на абсолютные () и относительные ():

х хист,,% 100%, хист где х - среднее арифметическое из серии полученных результатов, хист – истинное значение.

Сразу заметим, что величиной х может быть как результат анализа (содержание компонента), так и сам аналитический сигнал.

2. В зависимости от знака погрешности делят на положительные и отрицательные.

3. По типу связи между погрешностью и измеряемой величиной различают постоянные (абсолютная погрешность не зависит от измеряемой величины) и пропорциональные погрешности (их значение пропорционально измеряемой величине).

4. По источникам происхождения погрешности подразделяют на инструментальные, реактивные, методические, погрешности пробоотбора и т.п.

5. В зависимости от характера причин, которые их вызывают, различают случайные, систематические и грубые погрешности. На этой, наиболее важной, классификации остановимся более подробно.

Систематические погрешности – это погрешности, величину которых если не на практике, то в принципе, можно измерить и учесть, поскольку обычно они обусловлены известными причинами. Эти причины многообразны. Так, индивидуальные погрешности связаны с низкой квалификацией или физическими недостатками аналитика. Инструментальные – с несовершенством приборов. Погрешности методические – с отклонением поведения процесса от идеального: малая скорость реакции, неполнота ее протекания, побочные реакции и т.д. Методические погрешности особенно трудно обнаружить: часто для этого необходимо проведение продолжительных дополнительных экспериментов. Поскольку систематическая погрешность вызвана постоянно действующей причиной, она имеет постоянный знак (положительна или отрицательна) и влияет на правильность получаемого результата. К счастью, оптимизацией хода анализа ее можно свести к минимуму или устранить совсем.

Случайные погрешности – это погрешности, проявляющиеся в результате многократных повторных измерений. Происхождение их неизвестно, а знак и величина колеблются. Это погрешности, связанные с колебаниями температуры, давления, влажности воздуха, различным положением глаза во время измерения объема и других величин, случайными колебаниями в полноте опорожнения посуды и т.д. Случайная погрешность влияет на воспроизводимость измерений, она не может быть измерена, но может быть статистически оценена.

Грубые погрешности (промахи) – это явные огрехи анализа, допущенные из-за небрежности или заведомой некомпетентности аналитика: рассыпание образца, неверный подсчет разновесок, неумение пользоваться аппаратурой и т.д. Промах резко искажает результат анализа и обычно легко обнаруживается.

Оценка воспроизводимости результатов измерений Напомним, что под воспроизводимостью понимается рассеяние результатов измерений вокруг среднего значения. Основными критериями воспроизводимости служат размах варьирования, дисперсия, стандартное отклонение, доверительный интервал.

Пусть в серии параллельных измерений получены следующие результаты: х1, х2, х3 …, хn.Размах варьирования оценивается как разность между максимальным и минимальным значениями:

W = xmax - xmin Это – не очень надежная величина, но иногда она бывает достаточно наглядна.

Для расчета дисперсии (среднеквадратичной дисперсии) существует следующая формула:

n

–  –  –

Построение доверительного интервала основывается на законах математической статистики и обусловлено тем, что рассеяние результатов химического анализа подчиняется закону нормального (гауссовского) распределения. График зависимости вероятности получения той или иной погрешности от величины самой этой погрешности имеет вид симметричной колоколообразной кривой.

–  –  –

Из рассмотрения этого графика можно сделать некоторые качественные выводы.

1. Равновероятны как положительные, так и отрицательные отклонения получаемого результата от среднего арифметического.

2. Наиболее вероятны небольшие отклонения, но имеется возможность получения абсолютно любого результата: кривая не пересекается с осью абсцисс.

3. Вероятность получения явно абсурдных результатов ничтожна.

Для количественной оценки наших выводов отметим следующее. Показано, что результаты около 95 % измерений укладываются в диапазон от xист – 2 s до xист + 2s. А около 99 % - в диапазон от xист – 3 s до xист + 3s. Это означает, что примерно один раз из ста получается результат, резко (более чем на три стандартных отклонения) отличающийся от истинного значения. Скорее всего, этому результату не стоит доверять. Кстати, признак отклонения единичного результата за пределы 3 s часто используют для выбраковки данных, называя его "трехсигмовым критерием".

Результат, отличающийся от истинного на 2 s, встречается около 5 раз из ста.

Следовательно, с вероятностью 95 или 99 % можно утверждать, что истинный результат находится внутри некоторого интервала, достаточно легко рассчитываемого.

Как правило, именно величиной в 95 или 99 % надежности и озадачивает себя химиканалитик при получении конечного результата анализа. Понятно, что, если от результата зависит жизнь или здоровье человека, эту цифру стоит взять побольше (99 или даже 99,9%), в обычных же случаях ограничиваются величиной в 95 %.

Вероятность, с которой мы утверждаем, что истинное значение попадает в представленный нами интервал, называется доверительной вероятностью (Р). Итак, обычно принимают Р = 0,95.

В реальных анализах получают не очень много параллельных результатов (явно меньше 20), и в этих условиях закон нормального распределения работает не вполне корректно. Здесь значения подчиняются так называемому t-распределению (распределению Стьюдента). Поэтому доверительный интервал рассчитывается не совсем так, как следует из рисунка. Доверительный интервал описывается границами [ х ], где t P,n s n Здесь t – так называемый критерий Стьюдента (табличная величина). Его величина зависит как от заданной доверительной вероятности, так и от числа измерений. С увеличением доверительной вероятности его величина растет (следовательно, довериительный интервал становится шире). С ростом числа измерений величина t снижается.

Таким образом, при заданной доверительной вероятности для сужения доверительного интервала мы должны увеличивать число измерений или выбрать другой метод анализа, обладающий лучшей воспроизводимостью.

Рассмотрим конкретный пример.

Пусть при анализе неизвестного образца получено 5 параллельных значений измеряемой величины (например, массы компонента в мг): 20,0; 20,2; 20,4; 20,2; 20,7.

Расчет среднего арифметического дает цифру 20,34. Расчет по приведенным выше формулам дает: s = 0,264. В таблице найдем коэффициент Стьюдента для n = 5 и Р = 0,95: t = 2,78. Таким образом, t P, n s 2,78 0,264 0,328 n 5 и результат анализа надо было бы записать как 20,34 0,328. Однако нельзя забывать о количестве значащих цифр. Вас уже обучали этому в курсе физики, и, если этот материал не освоен, следует изучить его самостоятельно.

Поскольку все единичные результаты были даны с тремя значащими цифрами, конечный результат анализа должен быть записан следующим образом:

х = 20,3 0,3 при Р = 0,95 для n = 5 Именно такая форма записи показывает, что после проведения 5 параллельных определений вы утверждаете, что содержание определяемого компонента находится в интервале от 20,0 до 20,6 (мг).

Однако среди полученных результатов есть и "подозрительный" – 20,7. Возможно, это промах. Наиболее надежный прием обнаружения промахов состоит в использовании так называемого Q-критерия.

Находят отклонение выпадающего результата от ближайшего и делят его на размах варьирования:

20,7 20,4 Qэксп 0,43 20,7 20,0 Полученный результат сравнивают с табличным значением Q-критерия. Для n = 5 и Р = 0,90 Qтабл = 0,64. Поскольку экспериментальное значение меньше табличного, результат оставляют. В противном случае он является промахом, и его отбрасывают.

Методы математической статистики позволяют легко и надежно решать и другие вопросы, сопровождающие выполнение анализа.

Оценка правильности результатов анализа

Результат анализа можно представить в виде доверительного интервала только тогда, когда точно известно, что систематическая погрешность отсутствует. Иначе результаты не будут являться правильными. Следовательно, необходимо проверять правильность получаемых результатов, особенно при использовании малознакомой методики или при анализе необычного объекта. Перед окончательным расчетом результата систематические погрешности должны быть выявлены и устранены.

Величину систематической погрешности можно легко измерить только тогда, когда известно истинное значение измеряемой величины. Однако чаще всего это значение неизвестно, и для подтверждения правильности результата приходится проводить ряд дополнительных экспериментов. При этом обычно нетрудно устранить индивидуальные и инструментальные погрешности, а с методическими приходится серьезно повозиться. Рассмотрим приемы проверки правильности результатов анализа.

1. Варьирование величины пробы. Чаще всего объем пробы в повторных экспериментах удваивают, но можно изменить его в любое количество раз. По изменению полученного результата можно обнаружить постоянную систематическую погрешность.

2. Анализ независимыми методами. При этом в основу второго метода должны быть получены принципиально другие физические законы. В случае совпадения результатов можно считать использование данного метода оправданным. Иногда повторяют анализ в другой лаборатории или поручают его другому аналитику, но это малонадежный прием.

3. Выполнение холостого (контрольного) опыта. Повторяют все операции анализа в отсутствие анализируемого объекта (т.е. вместо анализируемого раствора берут только растворитель и делают с ним все то же самое). Если есть, например, реактивная погрешность, связанная с недостаточной чистотой реактивов, она проявится. В таком случае результат контрольного опыта служит поправкой к основному измерению.

4. Метод "введено – найдено". К анализируемой пробе добавляют точно известное количество определяемого компонента, причем в той же форме, в какой он находится в объекте, и повторяют анализ. Если результат повторного анализа выше основного на величину введенной добавки (с допустимой точностью), анализ считают выполненным правильно.

5. Анализ стандартных образцов. Это самый надежный прием выявления системАтической погрешности, а также аттестации методики анализа и проверки аналитических приборов. Стандартные образцы представляют собой материалы, состав и свойства которых надежно и официально установлены. Их выпускают всего на нескольких предприятиях и заранее многократно анализируют различными методами. Поэтому содержание компонентов, указанное в паспортных данных, можно принимать за истинное.

Непременное условие применения стандартного образца при анализе – максимальная близость его состава и состава анализируемого объекта. Для проверки правильности методики с ее помощью проводят детальный анализ стандартного образца и сравнивают полученные данные с паспортными данными для этого образца. При совпадении результатов методику считают применимой, а основной результат правильным.

В настоящее время готовят государственные стандартные образцы (образцы 1-го разряда) для металлов, сплавов, продуктов химической промышленности, лекарственных препаратов и т.п. Применяют и образцы 2-го разряда, т.е. приготовленные в отдельных лабораториях или предприятиях, в т.ч. и самим химиком-аналитиком из надежных реактивов. Естественно, использование таких образцов менее надежно. В целом следует сказать, что роль стандартных образцов в наше время сильно возрастает.

–  –  –

1. Классификация погрешностей анализа.

2. Размах варьирования.

3. Оценка воспроизводимости результатов измерений.

4. Оценка правильности результатов анализа

5. Оценка воспроизводимости результатов измерений

1. Димитриев, А.Д. Биохимия: учебное пособие / А.Д. Димитриев, Е.Д.

Амбросьева. – М.: Дашков и К, 2013. – 168 c. – ISBN 978-5-394-01790-2 // Доступ с сайта научной библиотеки СГАУ – ЭБС IPRbooks.

2. Основы аналитической химии: в 2 т. Т. 1 / ред. Ю. А. Золотов. – 4-е изд., доп. и перераб. – М. : Академия, 2010. – 384 с. – ISBN 978-5-7695-5821-4

Дополнительная литература

1. Аналитическая химия. Проблемы и подходы /ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 1. – М: МИР, 2004. – 608 с. – ISBN 5-03-003560-5, ISBN 3-527Аналитическая химия. Проблемы и подходы / ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 2. – М: МИР, 2004, 625 С. – ISBN 5-03-003599-1, ISBN 3-527Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение: Пер. с англ. / Б.

Глик, Дж. Пастернак. – М. : Мир, 2002.

4. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н.

Прудникова.– 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: ГИОРД, 2009. – 472 с. – ISBN 5-98879-008-9

5. Лебедев А. Т. Масс-спектрометрия в органической химии. – М: «Бином», 2003, 493 С. – ISBN 5-94774-052-4.

6. Основы аналитической химии: учебник; в 2 кн. Кн. 2. Методы химического анализа / Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова, В.И. Фадеева ; ред. Ю. А. Золотов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М. : ВШ, 2000. – 494 с. – ISBN 5-06-003559-Х.

7. Он-лайн учебник по биохимии – www.Biochemistry.ru

8. Сайт о химии – www.xumuk.ru

9. Электронная библиотека СГАУ – http://library.sgau.ru

–  –  –

Большинство современных приборов управляется через компьютер. При этом к прибору прилагаются (иногда за дополнительную плату) базы данных и специализированные программы.

Базы данных хранят характеристики сотен тысяч соединений, поэтому (в отдельных случаях) можно обходиться без стандартных образцов. Особенно это характерно, для приборов, которые имеют масс-селективный детектор. Такими детекторами часто снабжены приборы для проведения газохроматографического ананализа, высокоэффективной жидкостной хроматографии, капиллярного электрофореза и т.д.

Подобные приборы не получили широкого распространения из-за их высокой стоимости, однако их возможности чрезвычайно высоки, поэтому в ближайшие десятилетия они займут достойное место в оснащении биологических лабораторий.

Кроме того, в современных пакетах программ предлагаются инструменты для количественной обработки аналитического сигнала, которые экономят время исследователя, избавляя его от черновой работы. При этом, после получения экспериментальных данных, возможна их статистическая обработка.

Следует отметить, что точность измерения аналитического сигнала часто выше чем точность проведения эксперимента, поэтому важна работа самого исследователя, который должен нивелировать ошибки компьютера.

Часто компьютер выдает вероятность совпадения данных для исследуемого соединения и данных для соединения из базы данных в 99%, хотя это разные соединения, просто машина не учитывает ряд параметров, которые должен учитывать исследователь.

Необходимо учитывать не только характеристики самого соединения, но и характеристики примесей, присутствующих в нем.

Даже если исследуемый объект ранее был неизвестен, во многих случаях возможен теоретический расчет его характеристик (особенно спектральных данных), однако подобные программы поставляются за отдельную плату.

–  –  –

1. Пакеты программ для хроматографического анализа.

2. Пакеты программ для масс-спектрометрии.

3. Пакеты программ для ИК спектрометрии.

4. Пакеты программ для фотометрии.

5. Пакеты программ для ЯМР.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

–  –  –

1. Димитриев, А.Д. Биохимия: учебное пособие / А.Д. Димитриев, Е.Д.

Амбросьева. – М.: Дашков и К, 2013. – 168 c. – ISBN 978-5-394-01790-2 // Доступ с сайта научной библиотеки СГАУ – ЭБС IPRbooks.

2. Основы аналитической химии: в 2 т. Т. 1 / ред. Ю. А. Золотов. – 4-е изд., доп. и перераб. – М. : Академия, 2010. – 384 с. – ISBN 978-5-7695-5821-4

–  –  –

1. Аналитическая химия. Проблемы и подходы /ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 1. – М: МИР, 2004. – 608 с. – ISBN 5-03-003560-5, ISBN 3-527Аналитическая химия. Проблемы и подходы / ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 2. – М: МИР, 2004, 625 С. – ISBN 5-03-003599-1, ISBN 3-527Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение: Пер. с англ. / Б.

Глик, Дж. Пастернак. – М. : Мир, 2002.

4. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н.

Прудникова.– 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: ГИОРД, 2009. – 472 с. – ISBN 5-98879-008-9

5. Лебедев А. Т. Масс-спектрометрия в органической химии. – М: «Бином», 2003, 493 С. – ISBN 5-94774-052-4.

6. Основы аналитической химии: учебник; в 2 кн. Кн. 2. Методы химического анализа / Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова, В.И. Фадеева ; ред. Ю. А. Золотов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М. : ВШ, 2000. – 494 с. – ISBN 5-06-003559-Х.

7. Он-лайн учебник по биохимии – www.Biochemistry.ru

8. Сайт о химии – www.xumuk.ru

9. Электронная библиотека СГАУ – http://library.sgau.ru

–  –  –

Комбинаторика классических и инструментальных методов исследования Классические методы исследования биологических объектов часто совмещают с современными инструментальными методами анализа. Особенно данное явление распространено для регистрации аналитического сигнала.

Для непрерывного контроля состава растворов чаще всего используют дифференциальные рефрактометры, УФ-, спектрофотометрические, люминесцентные и кондуктометрические детекторы. В отдельных случаях используют ИК, массселективные и другие детекторы.

Дифференциальный рефрактометр – универсальный детектор, измеряющий показатель преломления системы. Его чувствительность относительно невысока, а диапазон линейности составляет около 4-х порядков концентрации.

УФ-детектор, настроенный на определенную длину волны, реагирует на все вещества, поглощающие при этой длине волны. Очевидно, он тем более чувствителен, чем сильнее молярные коэффициенты поглощения определяемых веществ отличаются от таковых для растворителя. Он достаточно селективен, предел обнаружения около 10-9 г.

Кондуктометрический детектор применяют в ионной хроматографии, поскольку его работа основана на измерении электропроводности раствора, пропорциональной числу ионов.

Вольтамперометрический детектор используют для определения электроактивных веществ. Это один из самых высокочувствительных детекторов.

Следует отметить, что часто специализированный биохимический анализатор представляет собой обычный спектрометр приспособленный для отдельных видов исследований и, в значительной степени, лишенный универсальности.

Вопросы для самоконтроля

1. Биохимические анализаторы с фотометрическими детекторами.

2. Автоматизация капиллярного электрофореза.

3. Цветные биохимические реакции и фотометрия.

4. Повышение чувствительности биохимических методов при помощи ФХМА.

5. Применение современных ФХМА в виде детекторов в классических методах анализа.

1. Димитриев, А.Д. Биохимия: учебное пособие / А.Д. Димитриев, Е.Д. Амбросьева.

– М.: Дашков и К, 2013. – 168 c. – ISBN 978-5-394-01790-2 // Доступ с сайта научной библиотеки СГАУ – ЭБС IPRbooks.

2. Основы аналитической химии: в 2 т. Т. 1 / ред. Ю. А. Золотов. – 4-е изд., доп. и перераб. – М. : Академия, 2010. – 384 с. – ISBN 978-5-7695-5821-4

Дополнительная литература

1. Аналитическая химия. Проблемы и подходы /ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 1. – М: МИР, 2004. – 608 с. – ISBN 5-03-003560-5, ISBN 3-527Аналитическая химия. Проблемы и подходы / ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 2. – М: МИР, 2004, 625 С. – ISBN 5-03-003599-1, ISBN 3-527Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение: Пер. с англ. / Б.

Глик, Дж. Пастернак. – М. : Мир, 2002.

4. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н.

Прудникова.– 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: ГИОРД, 2009. – 472 с. – ISBN 5-98879-008-9

5. Лебедев А. Т. Масс-спектрометрия в органической химии. – М: «Бином», 2003, 493 С. – ISBN 5-94774-052-4.

6. Основы аналитической химии: учебник; в 2 кн. Кн. 2. Методы химического анализа / Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова, В.И. Фадеева ; ред. Ю. А. Золотов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М. : ВШ, 2000. – 494 с. – ISBN 5-06-003559-Х.

7. Он-лайн учебник по биохимии – www.Biochemistry.ru

8. Сайт о химии – www.xumuk.ru

9. Электронная библиотека СГАУ – http://library.sgau.ru

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Аналитическая химия. Проблемы и подходы /ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 1. – М: МИР, 2004. – 608 с. – ISBN 5-03-003560-5, ISBN 3-527Димитриев, А.Д. Биохимия: учебное пособие / А.Д. Димитриев, Е.Д.

Амбросьева. – М.: Дашков и К, 2013. – 168 c. – ISBN 978-5-394-01790-2 // Доступ с сайта научной библиотеки СГАУ – ЭБС IPRbooks.

3. Аналитическая химия. Проблемы и подходы / ред: Р. Кельнер Ж.-М. Мерме, М.

Отто, Г.М. Видмер. Том 2. – М: МИР, 2004, 625 С. – ISBN 5-03-003599-1, ISBN 3-527Основы аналитической химии: в 2 т. Т. 1 / ред. Ю. А. Золотов. – 4-е изд., доп. и перераб. – М. : Академия, 2010. – 384 с. – ISBN 978-5-7695-5821-4

5. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение: Пер. с англ. / Б. Глик, Дж. Пастернак. – М. : Мир, 2002.

6. Щербаков, В.Г. Биохимия: учебник / В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н.

Прудникова.– 3-е изд., испр. и доп. – СПб.: ГИОРД, 2009. – 472 с. – ISBN 5-98879-008-9

7. Лебедев А. Т. Масс-спектрометрия в органической химии. – М: «Бином», 2003, 493 С. – ISBN 5-94774-052-4.

8. Основы аналитической химии: учебник; в 2 кн. Кн. 2. Методы химического анализа / Ю.А. Золотов, Е.Н. Дорохова, В.И. Фадеева ; ред. Ю. А. Золотов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М. : ВШ, 2000. – 494 с. – ISBN 5-06-003559-Х.

9. Он-лайн учебник по биохимии – www.Biochemistry.ru

10. Сайт о химии – www.xumuk.ru

11. Электронная библиотека СГАУ – http://library.sgau.ru

СОДЕРЖАНИЕ

Лекция 1. Классические методы исследования биологических объектов……………….

.3 Лекция 2. Пробоотбор и пробоподготовка………………………………………………….6 Лекция 3. Молекулярно-генетические методы исследования в биохимии………….........9 Лекция 4. Хроматографические методы анализа …………………………………………15 Лекция 5. Тонкослойная и колоночная хроматографии………………………………......18 Лекция 6. Газовая хроматография…………………………………………………..……...21 Лекция 7. Подбор условий хроматографии………………………………………………..24 Лекция 8. Детекторы в хроматографическом методе анализа……………………………26 Лекция 9. Метод ВЭЖХ………………………………………………………………..…...31 Лекция 10. Спектральные методы исследования в биохимии……………………….......33 Лекция 11. Капиллярный электрофорез…………………………………………………...40 Лекция 12. Атомно-адсорбционная и атомно-эмиссионная виды спектрометрии..…..45 Лекция 13. Обработка экспериментальных данных………………………………………55 Лекция 14. Компьютерная обработка данных ФХМА……………………………….…...61 Лекция 15. Комбинаторика классических и инструментальных методов исследования………………………………………………………………………………...63 Библиографический список………………………………………………………………...65 Содержание…………………………………………………………………………..……....67



Pages:     | 1 ||



Похожие работы:

«НАНОСИСТЕМЫ: ФИЗИКА, ХИМИЯ, МАТЕМАТИКА, 2013, 4 (1), С. 72–77 УДК 546.655.4-31 + 599.323.41 : 591.139 : 591.463 : 612.063 : 4.09 НАНОКРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ДИОКСИД ЦЕРИЯ ПОВЫШАЕТ ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ СТАРЕЮЩИХ САМЦОВ КРЫС Н. Я. Спивак1,2, Н. Д. Носенко3, Н. М. Жолобак1, А. Б. Щерба...»

«1.2017 СОДЕРЖАНИЕ CONTENTS АГРОЭКОЛОГИЯ AGROECOLOGY Новрузов В. С., Исаева Ф. М. Novruzov V. S., Isaeva F. M. Лишайники — биоиндикаторы атмосферного за Lichens are biological indicators of atmospheric po грязнения Кожаева Д. К., Жантеголов Д. В. Kozhay...»

«УДК 656.13:57.026 (551.554:628.51) Е. А. ДЖАЙЛАУБЕКОВ, А. К. ТОМАШЕЦ ВВЕДЕНИЕ СТАНДАРТОВ НА ВЫБРОСЫ ВРЕДНЫХ ВЕЩЕСТВ АВТОМОБИЛЬНОГО ТРАНСПОРТА В КАЗАХСТАНЕ Calculations and analysis of quantity of pollutants emission from motor transport in Kazakhstan are presented. In 2009 the Government of Kazakhstan introduces n...»

«Библиографические ссылки 1. Комплексный доклад о состоянии окружающей природной среды в Челябинской области в 2011 г.: информ. сб. Челябинск, 2012.2. Экологические последствия радиоакти...»

«А. С. АХИЕЗЕР Жизнеспособность российского общества Вынесенное в заголовок статьи понятие "жизнеспособность" является, быть может, центральной характеристикой любого общества. В России последних лет тема жизнеспособности, равно как и выживаемость, привлекает многих ученых. Однако сами эти понятия в русском языке несут, скорее, естест...»

«42 1141 ТЕРМОПРЕОБРАЗОВАТЕЛИ СОПРОТИВЛЕНИЯ ТСМ И ТСП МЕТРАН-200 Руководство по эксплуатации 203.01.00.000 РЭ Челябинск 454138 г. Челябинск, Комсомольский проспект, 29 Промышленная группа "Метран": тел.(35...»

«ПОВОЛЖСКИЙ ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2002. № 3. С. 236 – 245 УДК 598.1-15 МАТЕРИАЛЫ Ю.Ф. САПОЖЕНКОВА О ЖИВОРОДЯЩЕЙ ЯЩЕРИЦЕ LACERTA VIVIPARA JACQUIN, 1787 В КОСТРОМСКОЙ ОБЛАСТИ Н.М. Окулова 1, Т.М. Колесова 2 Институт проблем экологии и эвол...»

«Муниципальное бюджетное общеобразовательное учреждение "Средняя общеобразовательная школа № 6" Принято Утверждено на педагогическом совете приказом МБОУ "СОШ№6" протокол от 29.05.2017г. № 5 29.05.2017г № 153о РАБОЧАЯ ПРОГРАММА учебного курса "Готовимся к ЕГЭ п...»

«ISSN 1727-9712 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ГИГИЕНЫ ТРУДА И ПРОФЕССИОНАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ЕБЕК ГИГИЕНАСЫ ЖНЕ МЕДИЦИНАЛЫ ЭКОЛОГИЯ ГИГИЕНА ТРУДА И МЕДИЦИНСКАЯ ЭКОЛОГИЯ № 2 (47), 2015 г. OCCUPATIONAL HYGIENE and MEDICAL ECOLOGY ЕЖЕКВАРТАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЙ Ж...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "ЮЖНО – УРАЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ" ИНСТ...»

«База нормативной документации: www.complexdoc.ru СИСТЕМА НОРМАТИВНЫХ ДОКУМЕНТОВ В ГАЗОВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ ВЕДОМСТВЕННЫЙ РУКОВОДЯЩИЙ ДОКУМЕНТ КОНЦЕПЦИЯ ОБЕСПЕЧЕНИЯ РАДИАЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ В ДОЧЕРНИХ ОБЩЕСТВАХ И ОРГАНИЗАЦИЯХ ОАО "ГАЗПРОМ" ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ РЕГЛАМЕНТ ВРД 39-1.13-062-2002 ОТКРЫТОЕ...»

«Українська ентомофауністика 2011, 2(2) : 1–9 Дата публікації: 18.04.2011 Чехликовые моли (Lepidoptera, Coleophoridae): к фауне степной зоны Украины Ю. И. Будашкин Карадагский природный заповедник НАН Украины ул. Науки, 24 981...»

«ОГРАНИЧЕНИЯ ЖИЗНЕДЕЯТЕЛЬНОСТИ И РЕАБИЛИТАЦИЯ ПРИ НАРУШЕНИЯХ РИТМА СЕРДЦА Санкт Петербург СпецЛит УДК 616 036.8 О 39 Авторы составители: Заболотных Инга Ивановна — доктор медицинских наук; Кантемирова Раиса Кантемировна — кандидат медицинских наук; Ишу...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО НАУЧНЫХ ОРГАНИЗАЦИЙ РОССИИ Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт лесоведения Российской академии наук (ИЛАН РАН) Утверждаю Программа одобрена: Ученым советом ИЛАН РАН Директ...»

«Вопросник СОOОН/ЮНЕП по экологической статистике 2006 года Раздел: Водные ресурсы Содержание Введение, порядок заполнения, описание таблиц и таблица перевода единиц Руководство Список определений Определения Возобновляемые пресноводные ресурсы Таблица W1 Б...»








 
2017 www.kn.lib-i.ru - «Бесплатная электронная библиотека - различные ресурсы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.